培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
英文名稱:1-Naphthyl PP1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10762
產(chǎn)品介紹:
1-Naphthyl PP1(1-NA-PP1)是src家族抑制劑,對v-Src,c-Fyn,c-Abl,CDK2和CAMK II的IC50分別為1.0,0.6,0.6,18和22_mu_M。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:221243-82-9 別名:1-NA-PP 1 純度:98.56% 分子量:317.39 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
谷棒桿菌熒光標記豬胰島蛋白Anti-HGFAC Antibody人抗組蛋白抗體(AHA)
頭狀禿馬勃熒光標記雞卵白蛋白Anti-HGH1 Antibody人抗組蛋白抗體(AHA)
綠黃鏈霉菌熒光FITC標記兔IgG(流式同型對照)Anti-HGH1 Antibody人晶體蛋白α(Cryα)
Aeromonas aquariorum熒光標記牛IgGAnti-HIBADH Antibody人晶體蛋白α(Cryα)
林生毛霉熒光標記牛IgMAnti-HIF3A Antibody人晶體蛋白β(Cryβ)
美澳型核果褐腐病菌熒光標記雞IgGAnti-Hip Antibody人晶體蛋白β(Cryβ)
密歇根棍狀桿菌標記亞種熒光標記雞IgMAnti-HIF3A Antibody人抗膠原蛋白抗體(CLA)
甜菜慢生根瘤菌熒光標記狗IgGAnti-HIPK4 Antibody人抗膠原蛋白抗體(CLA)
熱葡糖土芽孢桿菌熒光標記狗IgMAnti-HIST1H2BH Antibody人抗角蛋白絲聚集/絲集蛋白抗體(AFA)
欽海特德沃斯氏菌熒光FITC標記羊IgG(流式同型對照)Anti-HIST1H2BB Antibody人抗角蛋白絲聚集/絲集蛋白抗體(AFA)
枯草芽孢桿菌熒光標記羊IgMAnti-HIST1H2BH Antibody人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)
枯草芽胞桿菌枯草亞種熒光標記豚鼠IgGAnti-HIRA Antibody人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)
蘇云金芽胞桿菌蘇云金變種熒光標記豚鼠IgMAnti-Histone H3 Antibody人抗核周因子抗體(APF)
多粘類芽胞桿菌熒光標記馬IgGAnti-HLA-DOA Antibody人抗核周因子抗體(APF)
長柄條孢牛肝熒光標記馬IgMAnti-HK3 Antibody人抗核抗體(ANA)
乳桿菌屬熒光標記人IgGAnti-HLA-DOA Antibody人抗核抗體(ANA)
紅細胞膜蛋白STOM抗體白腐菌人肝腹水腺癌細胞
鈉依賴性脯轉(zhuǎn)運PROT抗體小刺青霉大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞
基轉(zhuǎn)運蛋白2抗體產(chǎn)紫青霉人多發(fā)性骨髓瘤細胞(白介21基因修飾)
鈉離子通道蛋白7α/Na+CPtypeVIIα抗體淡紫青霉人非小細胞肺癌細胞
src家族抑制劑(1-Naphthyl PP1)天藍色鏈霉 液體雙抗增液Ⅰ型膠原交聯(lián)氨基端肽
曲霉 WLD培養(yǎng)基Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽
康寧木霉 不*瓊脂培養(yǎng)基抗性磷
LS培養(yǎng)基雌二
秦氏蜜環(huán) 直接藍6黃體生成
豬布魯氏 Culture培養(yǎng)基催乳
釀酒酵母 瓊脂LT100孕酮
釀酒酵母 NGKG寒天基礎(chǔ)培地促卵泡
Enterococcus faecium GYP白亞瓊脂培養(yǎng)基載脂蛋白A1
黃曲霉 Casman瓊脂培養(yǎng)基α平滑肌肌動蛋白
白蠟多年臥孔 豬副嗜血桿培養(yǎng)基纖連蛋白
東方異擔子 酪蛋白葡萄糖肉湯I型膠原蛋白
血桿 支原體培養(yǎng)基盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員2
雞腿173 EG培養(yǎng)基球蛋白G
豌豆根瘤 酪蛋白葡萄糖瓊脂球蛋白M
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)