中文名稱:Rac GTPase抑制劑
英文名稱:NSC 23766 trihydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10496
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:NSC 23766 trihydrochloride 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg NSC23766trihydrochloride是特異性的Rac GTPase抑制劑,用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1177865-17-6 純度:99.78% 分子量:530.96 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Acinetobacter soli Kim et al. 鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall1抗體Anti-GH1 Antibody腺A2b受體(ADORA2b)
擬枝孢鐮孢鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall4抗體Anti-GFRA1 Antibody腺A2a受體(ADORA2a)
魯考弗美奇酵母轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體Anti-GH1 Antibody線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)
蜥蜴纖細(xì)芽孢桿菌溴化太林相關(guān)蛋白2抗體Anti-GH1 Antibody線粒體乙脫氫(ALDM)
濕鏈霉菌S100鈣結(jié)合蛋白A8抗體Anti-GHR Antibody線粒體外膜轉(zhuǎn)位70A(TOMM70A)
黃曲霉唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集抗體Anti-GILT/IFI30 Antibody線粒體鐵蛋白(MFRN)
冷溫木拉克酵母唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集1抗體Anti-GHR Antibody線粒體鐵蛋白(FTMT)
枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄因子SP3抗體Anti-GILT/IFI30 Antibody線粒體融合2(MFN2)
香菇轉(zhuǎn)錄因子SP6抗體Anti-GIP Antibody線粒體融合1(MFN1)
PaenibacillusSPOP蛋白抗體Anti-GIP Antibody線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)
污黑腐皮殼鈉離子/?;悄懝厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Anti-GJA1 Antibody線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)
糖化酵母生長(zhǎng)抑14抗體Anti-GJA4 Antibody線粒體肌激1B(CKMT1B)
根白蟻傘碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4抗體Anti-GJA3 Antibody線粒體肌激1A(CKMT1A)
匍枝根霉原變種肺表面活性蛋白D抗體Anti-GJA1 Antibody線粒體甘油-3-磷?;D(zhuǎn)移(GPAM)
斷裂諾卡氏菌血影蛋白A鏈紅型抗體Anti-GJB1 Antibody線粒體超氧化物歧化(SOD2)
蕈狀芽孢桿菌分選連接蛋白5抗體Anti-GJA5 Antibody線粒體GTP1(MTG1)
抑基因SSDP2抗體刺囊毛霉人支氣管平滑肌細(xì)胞
鯊烯環(huán)氧抗體休哈塔假絲酵母休哈塔亞種人直腸平滑肌細(xì)胞
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5b抗體棘孢木霉人小腸平滑肌細(xì)胞
同源轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白Sin3A抗體長(zhǎng)枝木霉人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
Rac GTPase抑制劑果生鏈核盤(pán) 2,5-二溴苯磺酰脂聯(lián)
膠凍樣類芽孢桿 2-異丁叔丁酯羥甲基戊二單酰
鴨星狀病 3-氟-4-(三氟甲基)血清淀粉樣蛋白A
弗里克塞爾湖黃桿 3,4-環(huán)氧環(huán)己基-3,4-環(huán)氧環(huán)己酯超敏C反應(yīng)蛋白
產(chǎn)黃纖維單胞 乙基化鎂甲狀腺微粒體抗體
果蔬汁 op'-DDT、六六六 磺銀氧化三
尖孢鐮刀 化耐爾藍(lán)6-羥基硫褪黑
黃硬皮馬勃 4-羥基色C氧化
腸膜明串珠 6-硝基-2,3-二羥基喹喔啉琥珀脫氫
Corallococcus sp. 脲基三乙氧基硅烷三磷腺
畢赤酵母 1, 2-雙(二環(huán)己基磷基)-乙烷DNA甲基轉(zhuǎn)移3A
呂氏泰勒蟲(chóng)(渭源株) 4-巰基苯DNA甲基轉(zhuǎn)移3B
孟氏假單胞 3,3'-二羥基聯(lián)苯胰高血糖
默氏利斯特氏 4-乙氧基肉桂乳脫氫