產(chǎn)品介紹:
Lonafarnib是一種有效的法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶(FPTase)抑制劑,作用于H-ras,K-ras和N-ras,IC50分別為1.9nM,5.2nM和2.8nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):193275-84-2 別名:Sch66336 純度:99.42% 分子量:638.82 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱(chēng):FPTase抑制劑(Lonafarnib)
英文名稱(chēng):Lonafarnib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg
貨號(hào):FS-X10836
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
細(xì)鏈格孢人P糖蛋白/滲透性糖蛋白Anti-Phospho AQP2 (Ser261) Antibody人肌球蛋白輕鏈激(MLCK)
葡萄座腔菌小鼠凝血抗凝血復(fù)合物Anti-Phospho ANAPC1 phospho S355 (S355) Antibody人肌球蛋白輕鏈激(MLCK)
傳染性喉氣管炎病人大腸癌專(zhuān)一抗原3Anti-Phospho AR (AR) (Ser94) Antibody人硫轉(zhuǎn)移pi基因(GSTpi)
美味側(cè)耳小鼠抗凝血受體Anti-Phospho ATF2 (Ser490,498) Antibody人硫轉(zhuǎn)移pi基因(GSTpi)
馬賽菌大鼠髓過(guò)氧化物Anti-Phospho ARHGAP35 (Tyr15) Antibody人S轉(zhuǎn)移(GSTs)
漢遜德巴利酵母漢遜變種大鼠顆粒BAnti-Phospho ARHGAP22 (S397) Antibody人S轉(zhuǎn)移(GSTs)
果生鏈核盤(pán)菌人大腸癌專(zhuān)一抗原2Anti-Phospho ATM (S1981) Antibody人泛分解(DUB)
球毛殼小鼠凝血受體Anti-Phospho ATF2 (Thr52) Antibody人泛分解(DUB)
小馬勃人大腸癌專(zhuān)一抗原4Anti-Phospho BECN1 (Ser234) Antibody人分泌型磷脂A2(sPLA2)
炭黑曲霉大鼠顆粒AAnti-Phospho BRAF (Thr599) Antibody人分泌型磷脂A2(sPLA2)
類(lèi)干酪乳桿菌小鼠心肌肌鈣蛋白ⅠAnti-Phospho BECN1 (Ser295) Antibody人泛連接(E3/UBPL)
盤(pán)孢菌大鼠淋巴趨化因子Anti-Phospho ATRIP (Ser239) Antibody人泛連接(E3/UBPL)
屎腸球菌小鼠磷肌3激Anti-Phospho CAMK1 (Thr177) Antibody人肥大類(lèi)(MCT)
奧氏蜜環(huán)菌人粘蛋白/粘液5BAnti-Phospho CCDC88A (Ser1417) Antibody人肥大類(lèi)(MCT)
中慢生根瘤菌屬人腸三葉因子Anti-Phospho CCNC (Ser275) Antibody人多巴色異構(gòu)(DT)
小鼠β內(nèi)啡肽Anti-Phospho CD247 (Tyr142) Antibody人多巴色異構(gòu)(DT)
gp130結(jié)合蛋白GAM抗體宓花豆根瘤菌牛乳腺上皮細(xì)胞
B淋巴細(xì)胞基因1抗體毛霉DMEM/F12*培養(yǎng)基:
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1抗體蟬擬青霉HT-80*培養(yǎng)基:
跨膜蛋白16C抗體石榴小赤殼人骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞
FPTase抑制劑(Lonafarnib)Aurantimonas sp. (3-羧基)三苯基溴化膦病性肝炎
黑曲霉 2-芐環(huán)磷腺
福氏嗜冷桿 (4-羧丁基)三苯基溴化膦甲型肝炎病抗體
皺褶假絲酵母 甲氧甲酰基三苯基溴化膦活性氧簇
藤倉(cāng)鐮孢 丁基三苯基溴化膦(TBP)Toll樣受體9
牛肝 3-氟-4-甲β-羥基丁
泰國(guó)葡糖桿 4-氨基環(huán)己甲游離脂肪
粘紅酵母 4,4'-二甲苯亞砜磷脂
靈芝 2-甲氧基噻乙型肝炎病E抗原
綠產(chǎn)色鏈霉 3-巰基-1-烷磺鈉乙型肝炎病E抗體
假單胞 甲脒亞磺主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)
根霉 2,2-二甲基-6,6,7,7,8,8,8-七氟-3,5-辛二酮主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)
溜曲霉 (-)2,2′-(3α,8α-二氫-8H-茚并[1,2--d]噁唑Toll樣受體3
桃色枝頂孢 烯基苯基Toll樣受體7
大腸埃希 2-溴甲基烯乙酯單核趨化蛋白1