產(chǎn)品介紹:
TBB是一種選擇性的蛋白激酶CK2(CK2)抑制劑,IC50為1.6μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:17374-26-4 別名:NSC 231634;TBB (enzyme inhibitor) 純度:98.14% 分子量:434.71 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)
英文名稱:TBB
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號:FS-X10686
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
粉肉擬層孔菌絲裂原活化蛋白激激Anti-BEGAIN AntibodyYY1轉(zhuǎn)錄因子(YY1)
大洋枝芽孢桿菌激-M2(抗原)Anti-BEST1 AntibodyYbeY金屬肽(YBEY)
枯草芽孢桿菌激-M2(抗原)Anti-BIRC2 AntibodyX-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(Xtrp3)
尖孢鐮孢磷化Rho鳥交換因子2抗原Anti-BHLHE41 AntibodyX-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(Xtrp2)
茶輪斑盤多毛孢菌黑色-A(抗原)Anti-BIRC5 AntibodyX-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6(XRCC6)
微球菌激活受體2A/激活受體相互作用蛋白2a抗原Anti-BIVM AntibodyX-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白5(XRCC5)
柞蠶鏈球菌β-抑制蛋白1/2抗原Anti-BLCAP AntibodyX-脯酰肽3(XPNPEP3)
釀酒酵母激活受體2B/激活受體相互作用蛋白2b抗體Anti-BLK AntibodyX-連鎖凋亡蛋白抑制因子(XIAP)
泡囊短波單胞菌褪黑受體(抗原)Anti-BMP10 AntibodyX-框結(jié)合蛋白1(XBP1)
Enterobacter cloacae subsp. dissolvens致癌基因(抗原)Anti-BMP3 AntibodyWolfram綜合征蛋白1(WFS1)
核受體輔助抑制因子(抗原)Anti-BMP10 AntibodyWNT抑制因子1(WIF1)
哈茨木霉巢蛋白(神經(jīng)上皮干蛋白)(抗原)Anti-BMP6 AntibodyWNT1誘導(dǎo)信號通道蛋白2(WISP2)
灰黃青霉α1腎上腺能受體抗原Anti-BMP8A AntibodyWNT1誘導(dǎo)信號通道蛋白1(WISP1)
短桿狀馬賽菌脂肪炎癥因子Apelin36Anti-BMP8B AntibodyWhirlin蛋白(WHRN)
栗酒裂殖酵母巢蛋白(神經(jīng)上皮干蛋白)(抗原)Anti-BMX AntibodyWAP四二硫化物核心域蛋白5(WFDC5)
核盤菌神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗原Anti-BNIP2 AntibodyV-Yes-1Yamaguchi肉瘤病相關(guān)癌基因同源物(LYN)
胞粘蛋白結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白抗體Marivitahallyeonensis人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
過氧化物膜蛋白1抗體Roseovariusmarinus人B淋巴細(xì)胞
原鈣粘蛋白7抗體Roseivivaxlentus人口腔上皮細(xì)胞
原鈣粘附蛋白11X抗體Paucimonaslemoignei小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
蛋白激酶CK2抑制劑(TBB)惡臭假單胞 2-氨基-4-中性蛋白
灰綠鏈霉 間溴苯口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體
枯草芽孢桿 2-環(huán)戊酮脂氧合
滑假絲酵母 4-甲基噻唑周期依賴性激2
鏈霉 2,6-二氟芐基周期E2
蘇云金芽胞桿 正壬烷凋亡蛋白激活因子1
雞傷門氏 戊基溴化鎂溶液谷脫羧
釀酒酵母 十二烷二葡萄糖-6-磷
杉葉散斑殼(都不提供) 2-乙基乙基硫尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移
間型假絲酵母 正丁基化鎂胰蛋白
突尼斯葉桿 N-芐基化辛可寧[手性相轉(zhuǎn)移催化劑]性脂肪
大豆慢生根瘤 間苯結(jié)核分枝桿IgG抗體
康寧木霉 N2-異丁?;?2′-脫氧鳥結(jié)核分枝桿IgM抗體
鏈霉 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N2-異丁酰基-2'-脫氧鳥白血病病
彩色豆馬勃 甲基烯異辛酯泡沫病