核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法)正在熱銷的產(chǎn)品：DOK2 D酪氨激衰減蛋白2抗體辛酯 natural, ≥98%, FCC
Phospho-p56Dok2(Tyr351) 化D酪氨激衰減蛋白2抗體戊酯 ，≥99.7% (GC)
Phospho-p56Dok2(Tyr299) 化D酪氨激衰減蛋白2抗體戊酯 ≥98%, FG
Phospho-p56Dok2(Tyr142) 化D酪氨激衰
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
中文名稱：核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100T
貨號：FS-X9786
產(chǎn)品介紹:
NF-κB是一個多向性核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可調(diào)節(jié)細胞因子、趨化因子、粘附分子、生長因子、免疫受體、氧化應(yīng)激相關(guān)酶、轉(zhuǎn)錄因子、急性時相蛋白等基因的表達,功能涉及相應(yīng)的許多生理、病理過程。 DAPI 是一種藍色核酸染料，優(yōu)先染dsDNA，DAPI 表現(xiàn)為可集中結(jié)合在DNA 雙鏈的AT 小溝，結(jié)合后的DAPI 熒光會發(fā)生20倍增強。同時，DAPI 也可以結(jié)合RNA，與DNA 不同，一般認為DAPI 結(jié)合于RNA 的AU 區(qū)。DAPI/RNA 的復(fù)合體（500nm）有比DAPI/dsDNA 復(fù)合體（460nm）更長的熒光波長。DAPI 是一種常用的多色熒光技術(shù)中的核復(fù)染劑。 NF-κβ作為一種廣泛存在的轉(zhuǎn)錄因子，被激活由胞漿轉(zhuǎn)入胞核，從而參與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等?？梢詫⒓毎撕蚇F-κβ分別用DAPI 和FITC 染色，F(xiàn)lowSight 可觀察每個細胞是否發(fā)生NF-κβ核轉(zhuǎn)位，并量化分析NFkB 核轉(zhuǎn)位程度以及發(fā)生核轉(zhuǎn)位細胞的比例。 儲存：4℃避光，有效期12個月。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
聚集蛋白聚糖(AGC)英文名：AGC 磷化原癌基因c-Jun抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白相關(guān)蛋白1(MRP1)英文名：MRP1 磷化原癌基因c-Jun抗體包裝25g
巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)英文名：MIP3β 1號染色體開放閱讀框86抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP3α)英文名：MIP3α 8號染色體開放閱讀框59抗體包裝10MG
巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP1β)英文名：MIP1β 磷化補體成分5受體1抗體包裝1g
巨噬細胞來源趨化因子(MDC)英文名：MDC 補體C6抗體包裝1g
巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)英文名：MCSF 癌胚抗原相關(guān)粘附分子7抗體包裝1g
靜止Q6硫基氧化1(QSOX1)英文名：QSOX1 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝1g
精胺氧化(SMOX)英文名：SMOX 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝1g
精(Arg)英文名：Arg 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPδ抗體包裝1g
精加壓原(VP)英文名：VP 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPε抗體包裝5g
精加壓受體1B(AVPR1B)英文名：AVPR1B 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBPε抗體包裝1ml
精/絲豐富剪接因子4(SRSF4)英文名：SRSF4 腦血管內(nèi)皮粘附分子1抗體包裝5ml
晶狀體蛋白αB(CRYαB)英文名：CRYαB 補體C1QL4鏈多肽抗體包裝1g
金屬硫蛋白1(MT1)英文名：MT1 19號染色體開放閱讀框2抗體包裝5g
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格：含量≥700IU/mg,BR脂聯(lián)受體1試劑盒獐牙菜苦;Swertiamarine
巴氏醋桿菌Acetobacter│pasteurianus 質(zhì)量規(guī)格：效價測定脂聯(lián)試劑盒芝麻;Sesamin
ATCC56023資源名稱: 戴爾根霉 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP,BR脂肪轉(zhuǎn)運蛋白5試劑盒2-乙?；?/span>;2-Acetyla
核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法)玫瑰綠色鏈霉 2--3-氟芐脂肪結(jié)合蛋白
魔鬼弧 2,4-二苯甲脂肪型脂肪結(jié)合蛋白
溥硬皮馬勃 2-溴-3-吡啶脂肪型脂肪結(jié)合蛋白
鉤狀木霉 2,3,4-三氟溴苯脂褐
大豆慢生根瘤 2-氨基-7-氧代-4,5,6,7-四氫-1-苯并噻吩-3-羧乙酯脂褐質(zhì)
多殺性巴氏桿 D-(+)-乳甲酯脂類唾液
粗柄羊肚 Fura-2 ethyl ester脂聯(lián)受體1
大腸埃希 對環(huán)己酮甲乙酯脂聯(lián)受體2
變灰鏈霉 2-甲基丁脂磷壁
秀珍菇 1,6-萘二磺二鈉鹽脂酰-CoA合成
大腸埃希氏 N-芐基馬來酰亞脂氧A4
盔形畢赤酵母 苯甘鄧鹽直接膽紅
金橫裂鏈霉 N-基乙亞乙酯中間α球蛋白抑制因子H1
乳明串珠 2，3-二溴中間α球蛋白抑制因子H4
熱帶假絲酵母 2,4,6-三叔丁基苯中介
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
