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GBM(Human glomerular basement memb
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱：smoothened抑制劑(PF-04449913)
英文名稱：PF-04449913
產品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10832
產品介紹:
PF-04449913是一種有效的smoothened抑制劑。PF-04449913結合到人SMO(181-787氨基酸位點)，IC50為4nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1095173-27-5 別名：Glasdegib 純度：99.31% 分子量：374.44 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
寡鞘單胞菌小鼠羥脯Anti-PBOV1 Antibody人花生四烯5脂加氧(ALOX-5)
Arthrobacter人神經降壓Anti-PCDH11Y Antibody人花生四烯5脂加氧(ALOX-5)
普利茅斯大鼠解整合樣金屬蛋白8Anti-PDEA Antibody人5脂加氧(5-LO/LOX)
痢疾志賀氏菌大鼠抗Anti-PDE4C Antibody人5脂加氧(5-LO/LOX)
赭鱗蘑菇人神經激肽BAnti-PDGFC Antibody人腺環(huán)化1(AC-1)
俄勒岡靈芝小鼠骨保護配體Anti-PDE4C Antibody人腺環(huán)化1(AC-1)
苜蓿中華根瘤菌大鼠胰島抗體Anti-PDGFD Antibody人可溶性腺環(huán)化(sAC)
扣囊復膜孢酵母小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白Anti-PDGFRA Antibody人可溶性腺環(huán)化(sAC)
小馬勃人強啡肽Anti-PDHA1 Antibody人鳥脫羧(ODC)
灰黃淺黃酵母小鼠抗肌內膜抗體IgAAnti-PDIA4 Antibody人鳥脫羧(ODC)
貝氏葡萄座腔菌大鼠腎損傷分子1Anti-PDHA1 Antibody人蛋白酪激(PTK/CD115)
擬鷲峰假絲酵母人腦啡肽Anti-PDIK1L Antibody人蛋白酪激(PTK/CD115)
枯草芽孢桿菌大鼠抗單核抗體Anti-PDLIM1 Antibody人蛋白酪磷(PTP/PTPase/CD148)
紅色蠟蘑人γ肽Anti-PDP2 Antibody人蛋白酪磷(PTP/PTPase/CD148)
小鼠鐵蛋白Anti-PDK1 Antibody人腫瘤壞死因子α轉化(TACE)
食砜節(jié)桿菌小鼠碳酐2Anti-PDPK1 Antibody人腫瘤壞死因子α轉化(TACE)
RPS27A抗體栗疫菌大鼠膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基：
RHOG抗體矩圓黑盤孢大鼠海綿體內皮細胞*培養(yǎng)基：
髓系細胞觸發(fā)受體1抗體樟疫霉人胃癌阿霉耐藥株
癌/睪丸抗原113抗體*被孢霉屬人腎囊腫襯里上皮細胞
smoothened抑制劑(PF-04449913)植物乳桿 3-苯乙酯抗鴨甲肝病A型3抗體
大腸埃希 癸球蛋白M
秦氏蜜環(huán) 十四內
白靈側耳 2-溴-4'-基苯乙酮D-乳脫氫
大腸埃希 6--1-己脂多糖
聚生殼 1-(2-乙基)鹽鹽雌受體
曲霉 重鉻吡啶鎓圓環(huán)病抗體
耐輻射薄層 乙鹽鹽圓環(huán)病
鏈霉屬 2，4-二巰基嘧啶ATP合成
瑞士乳桿 DL-氨酰-DL-亮三磷腺
暗棕色桿屬 1-（硅烷氧基）環(huán)戊烯Ca2+ATP
長柄大環(huán)柄菇 2-(甲硫基)-2-噻唑啉巴氏桿抗體
鞘氨單胞 2--4-氟黑色
細疣籃狀 2-氟-L-苯促卵泡
尖孢鐮孢 苝孕酮
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
