產(chǎn)品介紹:
英文名稱:JNK-IN-8 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg JNK-IN-8是一種有效的JNK抑制劑,抑制JNK1,JNK2和JNK3,IC50分別為4.7nM,18.7nM和1nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1410880-22-6 純度:99.83% 分子式:C??H??N?O? 分子量:507.59 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:JNK抑制劑(JNK-IN-8)
英文名稱:JNK-IN-8
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10522
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
大腸埃希菌轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體Anti-IL18 Antibody糖磺基轉(zhuǎn)移1(CHST1)
土壤德沃斯氏菌絲/蘇激TLK2抗體Anti-IL18 Antibody糖合3(CHSY3)
居真菌細(xì)菌硫氧環(huán)蛋白還原1抗體Anti-IL1B Antibody糖合1(CHSY1)
Compostimonas跨膜蛋白173抗體Anti-IL18 Antibody糖蛋白M6B(GPM6B)
大腸埃希氏桿菌跨膜蛋白147抗體Anti-IL18 Antibody(PB0057)糖蛋白M6A(GPM6A)
諾卡氏菌Ten-eleven轉(zhuǎn)運基因1蛋白抗體Anti-IL18 Antibody糖蛋白A33(GPA33)
矩圓黑盤孢四分子交聯(lián)體5抗體(四旋蛋白)Anti-IL18 Antibody糖蛋白Ⅴ(GP5)
銅綠假單胞菌四分子交聯(lián)體6抗體(四旋蛋白)Anti-IL18 Antibody羰基還原4(CBR4)
淀粉產(chǎn)色鏈霉菌T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原1抗體Anti-IL1B Antibody羰基還原3(CBR3)
Bacillus aryabhattaiTM4SF3蛋白抗體Anti-IL1B Antibody羰基還原1(CBR1)
猴頭四分子交聯(lián)體10抗體(四旋蛋白)Anti-IL1B Antibody碳酐Ⅻ(CA12)
黃曲霉四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體Anti-IL1B Antibody碳酐Ⅸ(CA9)
蘇云金芽孢桿菌四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白)Anti-IL1R1 Antibody碳酐Ⅵ(CA6)
傘形卷霉四分子交聯(lián)體13抗體(四旋蛋白)Anti-IL1RN Antibody碳酐ⅤB(CA5B)
日本根霉四分子交聯(lián)體16抗體(四旋蛋白)Anti-IL1F10 Antibody碳酐Ⅳ(CA4)
多主棒孢霉四分子交聯(lián)體20抗體(四旋蛋白)Anti-IL1F10 Antibody碳酐Ⅲ(CA3)
溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體化膿性鏈球菌(釀膿鏈球菌)小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞
SNX27蛋白抗體腐皮鐮孢(斜面)小鼠腎小管上皮細(xì)胞
細(xì)胞周期G2/M期快速誘導(dǎo)蛋白SPDYA抗體費舍爾弧菌小鼠腎足突細(xì)胞
S100A2抗體環(huán)狀芽胞桿菌小鼠腎成纖維細(xì)胞
JNK抑制劑(JNK-IN-8)曲霉 3,3-二苯基-1-結(jié)締組織生長因子
芽孢桿 Boc-Arg(Pbf)-OH腺相關(guān)病
芽孢桿屬 二化雙(三環(huán)己基膦)鎳(II)腺相關(guān)病IgG抗體
枯草芽孢桿 N-甲基-L-脯,一水Aβ42
金色鏈霉 1,2-二(二苯基膦基)乙烷二化鈀(II)乳鐵蛋白
大腸埃希氏桿 2-(全氟辛基)乙基烯酯麻疹病抗體
釀酒酵母 2,4-二氟苯硫多巴D1受體
硬結(jié)節(jié)桿 2-氟-5-(三氟甲基)苯
固氮 3-甲氧基苯乙
黃曲霉 (S)-1-Boc-3-氨甲基吡咯烷隱孢子蟲
淺黃褐蠟傘 (S)-1-Boc-(3-Hydroxymethyl)pyrrolidine白介17
枯草芽孢桿 O-6-芐基鳥白介17A
云芝栓孔(變色栓) BOC-N-甲基-D-白介34
球孢白僵 D-阿卓糖β淀粉樣蛋白1-40
釀酒酵母 FMOC-L-4-血管性血友病因子