產(chǎn)品介紹:
GSK2830371是一種選擇性的Wip1磷酸酶(Wip1phosphatase)抑制劑,IC50為6nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1404456-53-6 純度:98.94% 分子量:461.02 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Wip1phosphatase Inhibitor
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10684
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
嗜中溫寒冷桿菌艾滋病?。乖?/span>Anti-B4GALT3 Antibodyβ-羥丁(OHβ)
解脂亞羅酵母熱休克蛋白-60(抗原)Anti-B4GALT1 Antibodyβ-內(nèi)啡肽(βEP)
Mucor ardhlaengiktus熱休克蛋白-70(多肽抗原)Anti-B4GALT3 Antibodyβ-骨膠原交聯(lián)(βCTx)
寬被多年臥孔菌銜接蛋白α抗原Anti-B4GALT5 Antibodyβ-促脂(βLPH)
白鬼筆Caspase 激活的脫氧核糖核抑制劑(抗原)Anti-BACH2 Antibodyβ2-微球蛋白(β2M)
釀酒酵母胰島降解(抗原)Anti-BAG1 Antibodyβ-1,4-半乳糖轉移1(β4GALT1)
葡萄牙棒孢酵母人胰島樣生長因子-I受體Anti-BAG4 Antibodyβ-1,4-N-乙酰半乳糖基轉移2(β4GALNT2)
需鈉弧菌胰島樣生長因子結合蛋白-5(抗原)Anti-BAGE2 Antibodyβ-1,3-葡糖基移1(β3GAT1)
斑玉蕈胰島(抗原)Anti-BAIAP2L1 Antibodyα-血紅蛋白穩(wěn)定蛋白(αHSP)
根瘤菌APC活化蛋白C抗原Anti-BAGE3 Antibodyα-乳清蛋白(αLA)
假單胞菌屬脂肪炎癥因子Apelin抗原Anti-BAGE4 Antibodyα-內(nèi)啡肽(αEP)
巨大芽胞桿菌Apelin receptor抗原Anti-BAIAP2L1 Antibodyα-黑色激(αMSH)
嗜松青霉APG4B自噬相關抗原Anti-BAIAP2L1 Antibodyα-骨膠原交聯(lián)(αCTx)
釀酒酵母載脂蛋白A1抗原Anti-BAIAP2L2 Antibodyα-胞襯蛋白(SPTAN1)
黑曲霉凝聚α/β抗原Anti-BAIAP2L2 Antibodyα白蛋白(AFM)
運動發(fā)酵單孢菌胰島受體-α(抗原)Anti-BAK1 Antibodyα2-纖溶抑制因子(α2PI)
磷相互作用結構域蛋白1抗體Lysobacterdaejeonensis人正常結腸細胞
磷脂磷2結構域3抗體蘑菇假單胞菌急性髓系細胞白血病細胞
石骨癥相關蛋白PLEKHM1抗體過渡原囊菌人骨髓基質細胞
血小板白細胞C激底物同源結構域M2抗體丁梭菌小鼠單核細胞巨噬細胞
Wip1磷酸酶抑制劑(GSK 2830371)黑曲霉 (2S)-(+)-縮水甘油基對甲苯磺酯P53蛋白
粘質沙雷氏 2--1,10-鄰二氮雜菲誘導骨髓白血病分化蛋白Mcl-1
褶皺曲霉 2-(三氟甲基)芐基二B瘤-XL
產(chǎn)灰色鏈霉 L-蘇糖鈣熱休克轉錄因子
枯草芽孢桿 D-蘋果二甲酯球蛋白E
檸條根瘤 3,3-二甲基丁酰核糖核
檸檬兩面神 三(3,6-二氧雜庚基)脫氧核糖核I型
粉紅聚端孢霉 2-甲基-2-金剛烷核糖核A型
松杉靈芝 2--5-Toll樣受體2
雙孢蘑菇 4-甲氧基苯乙Toll樣受體4
雙孢蘑菇 3-環(huán)己基過氧化還原2
榛針孢酵母 5-氟-1-茚酮12羥二十碳四烯
平菇—465 2-氟腺白介18
玫瑰單胞 五酮
糙皮側耳 3-甲乙酰乙