培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng):蘇丹Ⅲ酒精飽和溶液
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X10079
產(chǎn)品介紹:
用途: 紅色溶液,常用于脂肪染色,可用于油脂是否存在的檢驗(yàn) 注意事項(xiàng): 主要由蘇丹Ⅲ、乙醇組成。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
白地霉分裂周期相關(guān)蛋白Human RAB14(Ras-related protein Rab-14) 人低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒
卷枝毛霉灰藍(lán)變型豬瘟病抗體Human TACR3(Neuromedin-K receptor) 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白體9(LMP7/PSMB9)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框72抗體Human TAGLN3(Transgelin-3) 人登革熱抗體IgM(DF-Ab IgM)免疫試劑盒
發(fā)酵乳桿菌補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體Human ATP7A(Copper-transporting ATPase 1) 人登革熱抗體(DF-Ab)免疫試劑盒
巴西曲霉補(bǔ)體C4d-A蛋白抗體Human NEDD9(Enhancer of filamentation 1) 人登革熱(DF)抗體(IgG)免疫試劑盒
黃色短桿菌補(bǔ)體C4b-A蛋白抗體Human HLA-DRB5(HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 5 chain) 人的牛血清白蛋白(BSA)免疫試劑盒
中慢生華癸根瘤菌磷化整合β2/Integrin β2抗體Human S100A12(Protein S100-A12) 人蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)(PDI)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌磷化整合β2/Integrin β2抗體Human MCTS1(Malignant T cell-amplified sequence 1) 人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)免疫試劑盒
大腸埃希菌4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框28抗體Human SLC25A4(ADP/ATP translocase 1) 人蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白(PIF/DCD)免疫試劑盒
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白2抗體Human PLEKHO1(Pleckstrin homology domain-containing family O member 1) 人蛋白體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)免疫試劑盒
單形擬桿菌陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白3抗體Human GALC(Galactocerebrosidase) 人蛋白體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)免疫試劑盒
長(zhǎng)赤細(xì)菌液泡蛋白分選蛋白VPS13A抗體Human FAM214A(Protein FAM214A) 人蛋白激活復(fù)合體亞基2(PSME2)免疫試劑盒
靈芝(紅芝, 赤芝)鈣調(diào)磷B相關(guān)蛋白2抗體Human SERPINB13(Serpin B13) 人蛋白3特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)免疫試劑盒
輪枝孢CHRAC1蛋白抗體Human PTGDR(Prostaglandin D2 receptor) 人蛋白3抗體(PR3Ab)免疫試劑盒
嗜根寡養(yǎng)單胞菌ATP依賴的解螺旋抗體Human ABCA7(ATP-binding cassette sub-family A member 7) 人蛋白3(PR3)免疫試劑盒
多節(jié)孢屬X染色體開(kāi)放閱讀框6抗體Human TCF3(Transcription factor E2-alpha) 人蛋白磷2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)免疫試劑盒
加納鏈霉菌Streptomyces│ghanaensis Wallhäusser et al. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品藤皂H
: DSM29ATCC6344CCM2051NCIB8198NCTC6352NRRLB-383資源名稱(chēng): 蜂房類(lèi)芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%(GC)瓜子金皂己
苛求芽孢桿菌Bacillus│fastidiosus den Dooren de Jong 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(GC)柳穿魚(yú)黃
蘇丹Ⅲ酒精飽和溶液雜色云芝 (S)-1-(2,6-二-3-氟苯基)乙磷脂酰肌
桔青霉 2-羥基-3-甲氧基磷脂酰
蠟狀芽孢桿 (2S,4R)-1-((S)-2-(環(huán)戊氧羰基))-3,3-二甲基丁?;?-4-羥基吡咯烷-2-羧脫氫抗壞血還原
松口蘑 3--5-氮雜7-乙氧基-3-異吩惡唑酮-脫乙基
釀酒酵母 4-(1,2-苯并異噻唑-3-基)-1-哌脯肽
鮑魚(yú)側(cè)耳 2-乙酰-3-氟吡啶硫代反應(yīng)物
竹針孢座囊 N-乙基咔唑尼克酰-N-甲基轉(zhuǎn)移
梨多細(xì)源 (R)-(-)-3-羥基四尼克酰氨基轉(zhuǎn)移
嗜鹽動(dòng)性球 N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴磷二酯5
密歇根克雷伯氏 1-萘磺酰脂多糖
平田頭菇 1-萘磺酰β葡聚糖
硒砷芽孢桿 2,5-二二磷核酮糖羧化
裴氏著色霉 1-甲基-1H-吡唑-5-頻哪酯酮羧化
釀酒酵母 2-乙基蒽醌球蛋白
瑞山海源 2,5-二氟吡啶花葉病
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)