產(chǎn)品介紹:
用途: 通過(guò)碘-碘化(I-KI)染色,檢測(cè)花粉活力 注意事項(xiàng): 根據(jù)淀粉遇碘變藍(lán)的特性,從藍(lán)色的深淺程度來(lái)判斷花粉粒中淀粉的含量,進(jìn)而確定花粉活性的高低。 儲(chǔ)存條件:RT,避光,12個(gè)月 |
中文名稱(chēng):花粉活力染色液(I-KI法)
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50ml
貨號(hào):FS-X10178
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
乳乳球菌乳亞種蛋白激GCN2蛋白抗體Human USP38 大鼠轉(zhuǎn)錄因子P65(RELA)免疫試劑盒
地衣芽孢桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR78蛋白抗體Human USP39(Inactive ubiquitin-specific peptidase 39) 大鼠轉(zhuǎn)甲狀腺蛋白(TTR)免疫試劑盒
巨型艾美耳球蟲(chóng)G蛋白激活內(nèi)流通道蛋白2抗體Human USP44 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激蛋白22(TSC22)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體Human USP45 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒
雞油菌磷化生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體Human USP42 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2受體(TGF-β2R)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌磷化糖原合激3β抗體Human USP25 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)免疫試劑盒
孔雀石綠鏈霉菌磷化蛋白激GCN2蛋白抗體Human USP24 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1受體(TGF-β1R)免疫試劑盒
鐮孢屬磷化蛋白激GCN2蛋白抗體Human USP28 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒
教酒色鏈霉菌磷化接頭蛋白Gab 1抗體Human USP3 大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)免疫試劑盒
茶色粘傘菌磷化接頭蛋白Gab 1抗體Human USP32 大鼠晝夜節(jié)律蛋白同源物2(PER2)免疫試劑盒
Bacillus weihenstephanensis磷化葡萄糖合成1抗體Human USP33(Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 33) 大鼠周脂(Plin1/Peri/Plin)免疫試劑盒
蠟狀芽孢桿菌GCNT1葡萄糖轉(zhuǎn)移抗體Human SERPINB5(Serpin B5) 大鼠周期依賴(lài)性激5(CDK5)免疫試劑盒
谷棒桿菌胰島樣生長(zhǎng)因子1受體相互作用蛋白1抗體Human USP38 大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白(KISS1/Kisspeptin 1)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣根霉鳥(niǎo)環(huán)化α1/GCS-α-1抗體Human USF1 大鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子(TSGF)免疫試劑盒
鐘器腐霉G蛋白偶聯(lián)受體125抗體Human USP2 大鼠腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白6(TSG-6)免疫試劑盒
熱脂環(huán)芽胞桿菌G蛋白偶聯(lián)受體84抗體Human USF2 大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體4(TRAIL-R4)免疫試劑盒
: JCM20040=ATCC9046資源名稱(chēng): 棕色固氮菌 質(zhì)量規(guī)格:用于GC衍生化,≥98.5%高烏
香魚(yú)假單胞菌Pseudomonas│plecoglossicida 質(zhì)量規(guī)格:0.98長(zhǎng)春新堿
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:800目硫長(zhǎng)春新堿
花粉活力染色液(I-KI法)微桿屬 2,6-二甲基-4-硝基吡啶鈣蛋白
林生畢赤酵母 3-對(duì)苯甲鈣非依賴(lài)型磷脂A2
茯苓Z 3-糠鈣離子通道抗體
木豆根瘤 8-羥基喹啉-5-磺甘
小葉相思根瘤 5-溴-1H-苯并咪唑甘露糖結(jié)合蛋白;甘露糖結(jié)合凝集
束型青霉 1,1-二甲甘油三酯
天津李時(shí)珍氏 2-羥基-3,5,5-基-甘油三酯水解
金格桿 1-萘-4-磺肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子
橄欖色硬膜鏈霉 4-基肝糖原
粉樹(shù)孢 西他列汀肝生長(zhǎng)因子
Sphingomonas panni Boc-(R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁肝再生增強(qiáng)因子
魯氏接合酵母 戊基環(huán)己基環(huán)己酮肝脂
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) 4-(嗎啉磺?;?苯干擾α-1b
漢遜德巴利酵母 9-芴酮干擾調(diào)節(jié)因子3
蘇云金芽胞桿熊本亞種 4-甲氧基-1-萘干擾調(diào)節(jié)因子5