培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:姬姆薩染色液(吉姆薩染液)
英文名稱:Giemsa Staining Solution
產(chǎn)品規(guī)格:250mL
貨號:FS-X9760
產(chǎn)品介紹:
本產(chǎn)品由溶液A(Giemsa Stain 儲存液,10×)和溶液B(磷酸鹽緩沖液)組成,溶液A:溶液B=1:9混合成工作液后使用;亦可以分開使用,即先用Giemsa Stain染色,再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理,亦可以得到滿意的染色效果。 姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,Giemsa染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,姬姆薩染色液對胞漿著色力較強(qiáng),能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。本產(chǎn)品以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,含本公司*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。 儲存條件:常溫運(yùn)輸,室溫避光保存,有效期一年。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
序列相似家族135成員B(FAM135B)英文名:FAM135B 鈣粘蛋白23抗體包裝1g
嗅4(OLFM4)英文名:OLFM4 色p450 2s1抗體包裝5g
胸腺旁腺(PTMS)英文名:PTMS 角蛋白16抗體包裝100g
胸腺嘧啶核磷化(TP)英文名:TP 半胱蛋白蛋白-6抗體包裝25g
胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)英文名:TARC c-fos抗體包裝5g
胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成(TSLP)英文名:TSLP 9號染色體開放閱讀框23抗體包裝1g
胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK)英文名:BRAK 9號染色體開放閱讀框25抗體包裝100ml
興奮性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(EAAT2)英文名:EAAT2 9號染色體開放閱讀框30抗體包裝25ml
信號7A(SEMA7A)英文名:SEMA7A 9號染色體開放閱讀框37抗體包裝500ml
信號3E(SEMA3E)英文名:SEMA3E 9號染色體開放閱讀框40抗體包裝1g
鋅指同源框蛋白1B(ZFHX1B)英文名:ZFHX1B 9號染色體開放閱讀框41抗體包裝25g
鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)英文名:αZGP1 9號染色體開放閱讀框5抗體包裝5g
心營養(yǎng)樣細(xì)胞因子1(CLCF1)英文名:CLCF1 9號染色體開放閱讀框50抗體包裝100g
心型脂肪結(jié)合蛋白(FABP3)英文名:FABP3 9號染色體開放閱讀框57抗體包裝25g
心肌營養(yǎng)1(CT1)英文名:CT1 9號染色體開放閱讀框6抗體包裝500g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>97%,培養(yǎng)級左右不對稱發(fā)育因子2試劑盒白喉抗體國家標(biāo)準(zhǔn)品
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品組織因子途徑抑制物-2試劑盒抗?fàn)钕龠^氧化物抗體
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)組織因子途徑抑制物試劑盒乙型肝炎病表面抗體(Anti-HBs)
姬姆薩染色液(吉姆薩染液)枯草芽孢桿 2,4-二溴氟苯胎球蛋白A
綠色木霉 3-溴-2-甲氧基-5-硝基吡啶肽聚糖
榛黃假單胞 2-溴-1,4-二苯碳酐2
大腸桿 ,4-二苯碳酐9
釀酒酵母 2,3-二溴-5-硝基吡啶碳酐Ⅵ
大腸埃希氏 3,5-二氟苯羰基化蛋白
鏈霉屬 2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶糖聚糖
長枝木霉 L-環(huán)己基甘甲酯鹽鹽糖化血紅蛋白A1c
植物乳桿植物亞種 2-氨基-3,4-二氟糖化血清蛋白
美澳型核果褐腐病 1-Boc-哌糖磺基轉(zhuǎn)移10
短小芽孢桿 2,4,6-基芐糖鏈抗原19-9
Vagococcus sp. 1-Boc-哌糖鏈抗原50
楊樹細(xì)盾霉 5-溴戊基乙酯糖皮質(zhì)受體α
假單胞 酞菁鋅糖皮質(zhì)受體β
竹蓀屬 2--4-溴苯甲糖皮質(zhì)誘導(dǎo)的TNF受體配體
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)