中文名稱:CDK抑制劑(Roscovitine)
英文名稱:Roscovitine
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10382
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Roscovitine 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Roscovitine是一種有效的選擇性CDK抑制劑,抑制CDK5,Cdc2和CDK2,IC50分別為0.2μM,0.65μM和0.7μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:186692-46-6 別名:CYC202;R-roscovitine;Seliciclib 純度:99.77% 分子量:354.45 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
溶血不動(dòng)桿菌基因型4神經(jīng)元2抗體Human GH(Growth Hormone) 骨織(Ostn)
灰腐質(zhì)霉抑癌基因NDRG3抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) 骨粘連蛋白(ON)
地霉半乳糖酵母有絲分裂氧化1抗體Human GDNF(Glial cell line-derived neurotrophic factor) 骨形成蛋白7(BMP7)
德氏乳桿菌保加利亞亞種NADPH oxidase 3抗體Human IGF-2(Insulin-like growth factor II) 骨形成蛋白6(BMP-6)
明尼蘇達(dá)被毛孢NADPH氧化NOX家族的成員4抗體Human GH(Growth Hormone) 骨形成蛋白4(BMP4)
Novosphingobium panipatense分裂周期相關(guān)蛋白1抗體Human Gp130/IL6ST(Interleukin-6 receptor subunit beta) 骨形成蛋白15(BMP15)
雜色曲霉NFAM1抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) 骨形成蛋白(BMPs)
釀酒酵母環(huán)指蛋白67抗體Human GNLY(Granulysin) 骨涎蛋白(BSP)
中國毛霉神經(jīng)母瘤抑瘤蛋白1抗體Human IL-18R1/IL-18R(Interleukin-18 receptor 1) 骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)
大腸埃希氏菌嗜中性粒胞漿因子1抗體Human IL-3(Interleukin 3) 骨特異性堿性磷B(ALP-B)
微黃八疊球菌線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體Human IL-29(Interleukin 29) 骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)
韓國生孢八疊球菌雄激受體復(fù)合物相關(guān)蛋白/核受體相互作用蛋白抗體Human GzmB(Granzyme B) 骨橋(OPN)
貪噬菌屬9號染色體開放閱讀框156抗體Human HBEGF(Proheparin-binding EGF-like growth factor) 骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)
紅球菌核因子活化T胞漿蛋白3抗體Human HGF(Hepatocyte Growth Factor) 骨膠原交聯(lián)(Cr)
季也蒙畢赤酵母干轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體Human IL-28A(Interleukin-28A) 骨堿性磷(BALP)
棲泥鹽鹽八疊球菌神經(jīng)凋亡抑制蛋白抗體Human IL-33(Interleukin-33) 骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)
曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma74782,蛋白小于1%遠(yuǎn)志
ATCC9058=CBS2021=IFO0566=CCRC20862=NRRLY-488資源名稱: 季也蒙畢赤酵母 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma31149,蛋白小于5%異歐前胡
皮落青霉Penicillium│crustosum 質(zhì)量規(guī)格:98%,進(jìn)分歐前胡
CDK抑制劑(Roscovitine)Streptomyces flavovariabilis 17,21-二倍他松酯載脂蛋白A4
居白蟻 5--2-甲氧基苯載脂蛋白B
釀酒酵母 氮芥鹽鹽載脂蛋白B1
黑靈芝 5-溴噻吩-2-磺酰載脂蛋白B100
兩粵黃檀根瘤 5-溴-2-乙氧基吡啶載脂蛋白C2
灰藤黃鏈霉 3-基硅氧基-1-炔載脂蛋白C3
南方散斑殼 3-氨基-5-叔丁基異惡唑載脂蛋白E
瓜類* 2,3,4,5-四氟載脂蛋白M
中國臺灣根霉 鹽倍他汀增殖核抗原
盤長孢狀盤孢 蘇尼替尼增殖核抗原抗體
鐘器腐霉 乙鹽鹽粘蛋白;粘液5B
黃曲霉 2-甲基-3-呋喃硫乙酯粘蛋白2
產(chǎn)紫青霉 2,5-二甲基-3-呋喃硫粘蛋白5AC
炭黑曲霉 促腎上腺皮質(zhì)片段 (1-16), 人粘膠蛋白;肌腱蛋白C
噬瓊脂鏈卵 2-氟-5-羥基吡啶整合αM