產品介紹:
E42細胞膜完整性檢測試劑盒是利用E系列探針進行細胞染色的試劑盒。本試劑盒中的E42 細胞染色探針為紅色熒光標記的細胞探針,具有550/683nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。 E42探針是對細胞膜損傷細胞進行染色的試劑,不能穿透正常細胞膜,只有當細胞膜完整性受到影響時才可以染色細胞,進入細胞后會與細胞內蛋白質緊密結合,可有效標記膜不完整細胞。 儲存條件:染料-20℃避光保存;避免反復凍融;稀釋液2-8℃保存。 有效期:一年。 |
中文名稱:細胞膜完整性檢測試劑盒
英文名稱:
產品規(guī)格:500T
貨號:FS-X9872
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
醋唑(標準品)英文名: Lamotrigine軟骨性蛋白1抗體包裝500g
醋芬(標準品)英文名: D-Galacturonic acid富含半胱蛋白結合蛋白抗體包裝25g
醋磺米(標準品)英文名: D-Galacturonic acidCREB調節(jié)轉錄激活因子3抗體包裝5g
醋萘氫(標準品)英文名: Calcitriol軟骨相關蛋白CRTAP抗體包裝250g
醋己定(標準品)英文名: Candesartan cilexetil1號染色體開放閱讀框100抗體包裝50g
醋麥迪霉(標準品)英文名: Candesartan cilexetil1號染色體開放閱讀框104抗體包裝1g
醋曲安(標準品)英文名: Canertinib1號染色體開放閱讀框112抗體包裝5g
達卡巴(標準品)英文名: 2-Guanidinoethylmercaptosuccinic Acid 1號染色體開放閱讀框113抗體包裝1g
達沙替(無)(標準品)英文名: Carbetapentane citrate/Pentoxyverine citrate1號染色體開放閱讀框114抗體包裝25g
達托霉(標準品)英文名: Carprofen1號染色體開放閱讀框109抗體包裝5g
大觀霉(標準品)英文名: CarprofenCD93抗體包裝5ml
丹蒽醌(標準品)英文名: Catharanthine1號染色體開放閱讀框110抗體包裝25g
丹皮酚磺鈉(標準品)英文名: Albendazole1號染色體開放閱讀框111抗體包裝5g
丹曲林鈉(標準品)英文名: Albendazole1號染色體開放閱讀框106抗體包裝100mg
單硝異山梨酯(標準品)英文名: Cerivastatin sodium 色P450 11A1抗體包裝500mg
青霉菌屬菌種Penicillium│sp. 質量規(guī)格:≥98.50%;Src抑制劑旋毛蟲抗體試劑盒新綠原;Neochlorogenic
丁桿菌Clostridium│acetobutylicum 質量規(guī)格:>99%,BR溴脫氧核試劑盒; Coumarin
枯草芽孢桿菌Bacillus│sublitis 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品雄烯二試劑盒香蘭;Vanillin
細胞膜完整性檢測試劑盒谷棒桿 Atomoxetine HCl白介1β前體
大腸埃希 2,5-二氟苯轉錄因子維甲相關孤兒受體
黃曲霉 對乙氧基膜攻擊復合物
豌豆根瘤 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧尿脂肪膜關聯(lián)蛋白
脆泊氏孔 3-氨基-4-氟色P45019A1
糞銹傘 4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二CD47分子
意大利青霉 3-甲苯基硫代甲酰腎緊張A1
青海海境芽孢桿 4-甲苯基硫代甲酰CD68分子
直絲紫鏈霉 2-甲基-7-氮雜Ⅱ型前膠原羧基端肽
植物乳桿 Peptide YY porcineⅡ型原膠原N端前肽
圈卷產色鏈霉淺色變種 4-(二氟溴甲基)溴苯ⅡA型原膠原N端前肽
pGFP4412 2,3,6-三氟蛋白酪磷1B
球色單隔孢屬 4-甲基-4-(甲硫基)戊烷-2-酮T2
釀酒酵母 異丁己酯結核分枝桿Y-干擾
PSI-6130羥賴吡啶啉