中文名稱:多靶點抑制劑
英文名稱:Regorafenib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10304
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Regorafenib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Regorafenib是一種多靶點抑制劑,靶作用于VEGFR1/2/3,PDGFRβ,Kit,RET和Raf-1,IC50值分別為13/4.2/46,22,7,1.5和2.5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:755037-03-7 別名:BAY 73-4506 純度:99.63% 分子量:482.82 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
比阿婁維扎青霉 磷化淋巴特異性蛋白酪激抗體Human PKD2L1 因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)
枯草芽孢桿菌膜相關(guān)蛋白酪激Lyn抗體Human PIWIL2 纖維連接蛋白(cFn)
黑腐皮殼磷化膜相關(guān)蛋白酪激Lyn抗體Human PIP5K1A 外基質(zhì)磷糖蛋白(MEPE)
解脂假絲酵母磷化膜相關(guān)蛋白酪激Lyn抗體Human PJA1 色P450c21B/21-羥化(CYP21B)
洛格酵母腦瘤相關(guān)基因抗體Human PIP5K1B 色P450c21A/21-羥化(CYP21A)
香菇大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體Human PIP5K3 色P450(CYP450)
相思根瘤菌神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體Human PIP5KL1 色c氧化Ⅵα亞基多肽1(COX6A1)
大腸埃希氏桿菌富含亮重復(fù)序列/Ⅲ型纖維連接蛋白4抗體Human PITPNA 色C氧化(COX)
球孢白僵菌層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PIR 色C-1(CYC1)
釀酒酵母層粘蛋白α4抗體(Lamininα4)Human PITPNB 色C(Cyt-C)
鏈霉菌 (灰褐類群)脂質(zhì)運載蛋白1抗體Human PIGT 色b561(cytb561)
天藍色鏈霉菌淋巴趨化因子抗體Human PIGS 絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)
產(chǎn)短桿菌低密度脂蛋白受體5樣蛋白抗體Human PIGZ 絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)
根瘤菌富含亮重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白3抗體Human PIH1D1 膜表面免疫球蛋白(SmIg)
單色革蓋菌扁豆凝集Human PIK3C2G 膜DNA抗體(cmDNA)
卷枝毛霉磷化富亮重復(fù)激2抗體Human IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) 角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)貝母乙
暫無Prolixibacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)貝母
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC)(T)2,3,5,4-四羥基二乙烯葡萄糖
多靶點抑制劑枯草芽孢桿 3-氨基苯半硫鹽香草扁桃
大腸埃希氏 2,4-二氨基苯氧基乙-二鹽基質(zhì)金屬蛋白16
淡紫擬青霉 2,3-二氧亞甲酰檸檬合成,線粒體
紫色倫茨氏 2,3-二氧亞甲酰亮氨基肽
曲霉 8-羥基-1,2,3,4-四氫喹啉肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1α
柄小鐮孢 2,5-二苯并噻唑磷脂酰肌-4-磷
彩色豆馬勃4-1 2-基環(huán)戊酮色P451
Diaporthe vaccinii Shear 駢三氮唑色P450 17A1
銅綠假單胞 環(huán)吡酮色P450家族成員11B1
煙曲霉 2,5-二溴煙核糖基轉(zhuǎn)移1
日本根霉 芐基縮水甘油5核
Sphingopyxis 2--4-磷化磷肌3激
大豆慢生根瘤 3,4-二氟甲苯絨毛膜促性腺
爪哇毛霉 2-氟-5-溴煙甲酰基轉(zhuǎn)移
pCEP4(有突變點) 5-溴-6-氟煙次核環(huán)水解