中文名稱(chēng):綠藻保色液Ⅱ
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X10194
產(chǎn)品介紹:
用途: 用于綠藻的保色保存。 注意事項(xiàng): 主要由醋酸銅、福爾馬林等組成。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
布氏艾美耳球蟲(chóng)溶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體Human TROVE2 大鼠維生B6(VB6)免疫試劑盒
黃傘溶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體Human TROAP 大鼠維生B12(VB12)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌促性腺激釋放激2抗體Human TRPC4 大鼠維生A(VA)免疫試劑盒
黑曲霉基葡萄糖6-硫酯抗體Human TRPC4AP 大鼠維甲受體應(yīng)答蛋白2(RARRES2)免疫試劑盒
蠟樣芽孢桿菌高爾基體膜相關(guān)蛋白抗體Human TRPA1(Transient receptor potential cation channel subfamily A member 1) 大鼠微纖絲相關(guān)糖蛋白3(MFAP3)免疫試劑盒
冬蟲(chóng)夏草高爾基體膜相關(guān)蛋白5抗體Human TRIM69 大鼠微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)免疫試劑盒
灰色困難鏈霉菌高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體Human TRPC5 大鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌高爾基復(fù)合體CFR1抗體Human TRIM67 大鼠網(wǎng)膜(omentin)免疫試劑盒
黑化鏈霉菌高爾基體蛋白97抗體Human TRIM9 大鼠晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)免疫試劑盒
釀酒酵母高爾基體蛋白A亞基4抗體Human TRIP10 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒
膠孢高爾基體外周膜蛋白1抗體Human TRIM37 大鼠晚期糖基化端產(chǎn)物特異受體(AGER)免疫試劑盒
氏假單胞菌高爾基體膜蛋白抗體Human TRIM38(tripartite motif-containing 38)大鼠蛙皮,雨蛙肽免疫試劑盒
假單胞菌高爾基體磷蛋白6抗體Human TRIM39 大鼠脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)免疫試劑盒
纖細(xì)白僵菌高爾基SNAP受體復(fù)合物1抗體Human TRIP13 大鼠脫氫表雄硫酯(DHEA-S)免疫試劑盒
艾比湖嗜鹽堿紅菌谷草酰乙轉(zhuǎn)1樣蛋白1抗體Human TRIM44 大鼠脫氫表雄(DHEA)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌G蛋白偶聯(lián)受體52抗體Human TRIM41 大鼠褪黑受體免疫試劑盒
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:干燥劑用金石蠶
枯草芽孢桿菌Bacillus│sublitis 質(zhì)量規(guī)格:pellets,3-5 mm升麻-3-O-α-L-拉伯糖
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:pellets, 2.5-3.5 mm木蝴蝶B
綠藻保色液Ⅱ賴(lài)芽胞桿屬 4,5-二-2-芐基-3(2H)-噠透明質(zhì)
擬盤(pán)多毛孢 7-氨基-1-甲基吲唑透明質(zhì)
根霉屬 3-乙酮突觸
球孢白僵 4-溴-2-氟-5-褪黑
地衣芽孢桿 三(4-苯)脫氫表雄酮
毛韌革 2-氨基-4--3-吡啶脫氧吡啶;脫氧吡啶啉
微球 2-噻唑-4-甲乙酯晚期糖基化終末產(chǎn)物
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 2-溴-4-氨基噻唑鹽晚期糖基化終末產(chǎn)物受體
根瘤 1-甲磺?;?2-咪唑烷酮晚期氧化蛋白產(chǎn)物
耐鹽四聯(lián)球 4-氨基-3,5-二甲酯網(wǎng)膜
紫薇布勒酵母 5--2-氨基噻唑維生D
香菇 1-甲基咪唑-4-甲乙酯維生D25羥化
枯草芽胞桿枯草亞種 5-甲酰基水楊甲酯維生D3
細(xì)枝孢 2-甲基-4-羥基苯甲維生K2
嗜中溫寒冷桿 3,5-二羥基胃蛋白