膠原酶III型正在熱銷的產(chǎn)品：CGRP CGRP降鈣因相關(guān)肽抗體山梨 >99.0%(T)
ChAT ChAT膽酰轉(zhuǎn)移抗體2-吡啶 98%
CHK1 周期檢測點激1抗體3-吡啶 99%
CHK2 周期檢測點激2抗體4-吡啶 98%
Phospho-CHK2 (Thr68) 化周期檢測點激2抗體山梨 AR，99%
Chloramphenicol 霉抗體山梨 CP，99%
Gentamici
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱：膠原酶III型
英文名稱：Collagenase III
產(chǎn)品規(guī)格：100mg
貨號：FS-X9753
產(chǎn)品介紹:
本品為III型膠原酶，≥100 U/mg solid，常用于乳腺細(xì)胞和胎兒細(xì)胞的制備。 本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白，多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。 膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。 目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向： 1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備； 2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備； 3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備； 4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實驗。 分子量：68-130 kDa 激活劑：Ca2+、Zn2+ 抑制劑：EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum 活力單位：在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨的酶量定義為1個酶活力單位。 儲存條件：4℃避光，有效期兩年 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
著絲粒蛋白H(CENPH)英文名：CENPH 癌相關(guān)蛋白2抗體包裝100g
粘蛋白5B(MUC5B)英文名：MUC5B 癌抗雌激耐藥蛋白1包裝25g
粘蛋白5AC(MUC5AC)英文名：MUC5AC 胞漿支鏈基轉(zhuǎn)抗體包裝500g
粘蛋白4(MUC4)英文名：MUC4 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝1g
粘蛋白2(MUC2)英文名：MUC2 促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體包裝250mg
粘蛋白1(MUC1)英文名：MUC1 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體包裝5g
早期生長應(yīng)答因子4(EGR4)英文名：EGR4 狀腺激受體共激活蛋白抗體包裝1g
早期生長應(yīng)答因子2(EGR2)英文名：EGR2 磷化促凋亡Bik蛋白抗體包裝100mg
早期生長應(yīng)答因子1(EGR1)英文名：EGR1 蛋白酪激BAP135抗體包裝1g
再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)英文名：REG3γ 磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝5g
再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)英文名：REG3α 磷化Bax抗體包裝1g
再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)英文名：REG1β Bcl-10抗體包裝25g
載脂蛋白H(APOH)英文名：APOH 原癌基因Bcl-6抗體包裝5g
載脂蛋白F(APOF)英文名：APOF 磷化Bcl-10抗體包裝100g
載脂蛋白E(APOE)英文名：APOE 磷化死亡調(diào)解子抗體包裝25g
整合樣金屬蛋白與凝血樣2蛋白抗體肌肉生長抑制(MSTN)PRT-060318 (PRT318)是新穎選擇性的酪激 (Syk) 抑制劑， IC50值為4 nM。
膠原酶III型蟹枝毛殼 5,6,7,8-四氫-8-羥基喹啉上皮黏附分子
矮小傘枝霉 4--3-神經(jīng)
蘇云金芽胞桿多窩亞種 5-甲基尿甙神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白
陰溝腸桿 4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮神經(jīng)節(jié)脂M3抗體
埋藏曲霉 1-乙基環(huán)戊神經(jīng)生長導(dǎo)向因子
異常漢遜酵母 (3AR,7AS)-REL-八氫-1H-異鹽鹽神經(jīng)生長因子
泛枝芽孢桿 3--2-羧神經(jīng)絲蛋白
野蘑菇 二甲硫烷神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1
多根硬皮馬勃 月桂鋰神經(jīng)肽A
相思根瘤 埃索美拉唑鈉神經(jīng)肽B
乳桿屬 4,4-二甲氧基丁神經(jīng)肽Y
枯草芽胞桿 2,3,4-三氟苯甲神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1
豬輪狀病 3-(三氟乙?；?神經(jīng)粘附分子1
谷棒桿 1-N-Cbz-4-基神經(jīng)酰
釀酒酵母 甲磺己酯神經(jīng)型一氧化氮合成
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
