產(chǎn)品介紹:
本品為I型膠原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺等組織和細(xì)胞的解離。
本品來(lái)源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織
產(chǎn)品介紹:
本品為I型膠原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和腎上腺等組織和細(xì)胞的解離。 本品來(lái)源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白，多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。 膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。 目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向： 1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備； 2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來(lái)源細(xì)胞的制備； 3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備； 4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。 酶活力單位定義 在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。 儲(chǔ)存條件：4℃，有效期兩年 |
中文名稱：膠原酶I型
英文名稱：Collagenase I
產(chǎn)品規(guī)格：100mg
貨號(hào)：FS-X9751
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)英文名：TRAIL 腦肌激BCK抗體包裝5g
腫瘤壞死因子受體超家族成員8(TNFRSF8)英文名：TNFRSF8 β葡萄糖抗體包裝10MG
腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)英文名：TNFRSF5 癌相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
腫瘤壞死因子受體超家族成員4(TNFRSF4)英文名：TNFRSF4 Bcl2樣凋亡蛋白9抗體包裝5g
腫瘤壞死因子受體超家族成員10A(TNFRSF10A)英文名：TNFRSF10A BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體包裝1g
腫瘤壞死因子配體超家族成員14(TNFSF14)英文名：TNFSF14 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體包裝5g
腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)英文名：TNFSF13 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體包裝1g
腫瘤壞死因子β(TNFβ)英文名：TNFβ BXDC2蛋白抗體包裝5g
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6(TNFαIP6)英文名：TNFαIP6 BOLA1蛋白抗體包裝1g
中性粒細(xì)胞明膠關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)英文名：NGAL BOLA2蛋白抗體包裝25g
中性粒細(xì)胞激活蛋白3(NAP3)英文名：NAP3 殺菌通透性增加蛋白樣1抗體包裝5g
中性粒細(xì)胞彈性蛋白(ELA2)英文名：ELA2 殺菌/通透性增加蛋白樣2抗體包裝25g
中期因子(MK)英文名：MK 嗜乳脂蛋白樣3抗體包裝250mg
中間α-球蛋白抑制因子H5(ITIH5)英文名：ITIH5 殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體包裝1g
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1(LCN1)英文名：LCN1 BRD1蛋白抗體包裝25g
原癌基因AF4蛋白抗體肌肉生長(zhǎng)抑制(MSTN)AZD9496 是有效,選擇性的雌激受體 (ERα) 拮抗劑，IC50 為 0.28 nM。
膠原酶I型菊異莖點(diǎn)霉 伯森坦溶血磷脂
萊西氏屬 4-噻吩并[3,2-d]嘧啶肉堿脂酰轉(zhuǎn)移
褪色沙雷氏（粘質(zhì)沙雷氏） 苯海拉明鹽鹽肉堿軟脂?；D(zhuǎn)移1
水叢毛單胞 1-巰甲基環(huán)基乙肉堿軟脂酰基轉(zhuǎn)移2
土生隱球酵母 偏鉛乳清磷核糖轉(zhuǎn)移
秀珍菇 3-甲氧基-4-(二氟甲氧基)苯甲乳
紫棕炭團(tuán) 5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-異丁?；B(niǎo)-3'-乳脫氫
嗜熱鏈球 3-環(huán)甲氧基-4-二氟甲氧基乳脫氫A
土生克雷伯氏 N-Boc-甘乙酯乳鐵蛋白
馬昆德擬青霉 1,6-二溴-2-萘酚乳鐵蛋白肽
布魯氏 4-溴-2-氟芐鹽鹽狀瘤病抗體
釀酒酵母 4-(2-代乙基)辛基苯癌標(biāo)志物-CA153
彎曲芽孢桿 季戊四三烯基珠蛋白
解淀粉周培瑾氏 2,4-二噻吩并[3,2-D]嘧啶乳脂球表皮生長(zhǎng)因子8
可可球二孢 1-叔丁酯哌軟骨寡聚基質(zhì)蛋白
