產(chǎn)品介紹:
用途: 肥大細胞脫顆粒染色 注意事項: 肥大細胞呈紫色至深紫色,彈力纖維呈紫色,紅細胞呈橙黃色,其余組織呈淡黃色,其他細胞多不著色。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
中文名稱:肥大細胞染色液(醛品紅-橙黃G法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×20ml|4×50ml
貨號:FS-X9898
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
固氮菌聚集蛋白抗體Human KHDC1 小鼠熱休克因子1(HSF1)免疫試劑盒
葡萄座腔菌調(diào)亡誘導因子抗體Human KHDC3L 小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫試劑盒
檸檬黃色紅色桿菌調(diào)亡誘導因子抗體Human KDSR 小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)免疫試劑盒
中國臺灣根霉間變型淋巴瘤激抗體Human KHSRP 小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
煙色擬盤多毛孢α-甲基?;贵wHuman KHDRBS3 小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)免疫試劑盒
假單胞菌屬膜粘連蛋白A1抗體Human KIF1C 小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)免疫試劑盒
葡萄座腔菌自噬相關(guān)蛋白1抗體Human KIF20A 小鼠熱休克蛋白27(HSP-27)免疫試劑盒
膠孢β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體Human KIAA1191 小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)免疫試劑盒
洋蔥伯克霍爾德氏菌腺瘤肉調(diào)節(jié)蛋白抗體Human KIAA1468 小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒
乳粉 乳菌計數(shù) 銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體Human CEMIP(Cell migRation-inducing and hyaluronan-binding protein) 小鼠固(ALD)免疫試劑盒
德氏乳桿菌德氏亞種水通道蛋白-7抗體Human KIAA1429 小鼠去甲腎上腺(NA)免疫試劑盒
波蘭青霉谷基轉(zhuǎn)移1抗體Human KIAA1530 小鼠趨化因子配體1(CCL1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌p21活化蛋白激ARHG7抗體Human KIAA1602 小鼠趨化因子(FK)免疫試劑盒
三寶壟根霉磷化肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體Human KIDINS220 小鼠趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)免疫試劑盒
淺黃微桿菌2-基乙硫雙加氧抗體Human KIAA0430 小鼠(HYD)免疫試劑盒
松杉靈芝血管緊張Ⅱ-1型受體抗體Human KIAA1984 小鼠羥甲基戊二單酰還原(HMG-CoAR)免疫試劑盒
球毛殼Chaetomium│globosum Kunze 質(zhì)量規(guī)格:>98~102%,BR白介2誘導的T激試劑盒香蜂草
蘑菇輪枝菌Verticillium│psalliotae 質(zhì)量規(guī)格:>97%,分子生物學級白介2受體試劑盒香紫蘇內(nèi)酯
: AS3.14資源名稱: 曲霉 質(zhì)量規(guī)格:活:> 30 U/mg,BC白介2可溶性受體β鏈試劑盒胸腺
肥大細胞染色液(醛品紅-橙黃G法)綠色木霉 苯硫基乙胃癌抗原MG7
擴展青霉 3-(2-吡啶基氨基)乙酯I
姬菇 1-苯基氨基脲III
2--3-氟IV
衛(wèi)矛 3-(4-溴苯基)-9-苯基-9H-咔唑V
枯草芽孢桿 2-甲氧基-3-溴-5-吡啶Ⅶ
黃海鞘氨盒 氧化異佛爾酮Ⅷ
香菇 3-甲基-2-苯基吡啶Ⅸ
伯頓絲孢畢赤酵母 L-3-環(huán)基Ⅺ
巴斯德畢赤酵母 3--5-甲氧基苯XII
費氏中華根瘤 3-溴芐Ⅱ
美澳型核果褐腐病 Fmoc-L-苯甘2,3-雙加氧1
鞘氨單胞 N,N'-二芐基-1,3-二鈣結(jié)合蛋白B1
銀杏盤多毛孢 2,3-二磷脂A2
pESC-Ura 4'-甲氧基-2-苯基苯乙酮elabela