小鼠精原細胞系公司正在出售的產品：神經細胞 英文名稱：HM 規(guī)格:1 x 10^6 cells/vial
神經細胞 英文名稱：HN 規(guī)格:5 x 10^6 cells/vial
神經細胞 英文名稱：HN 規(guī)格:10 x 10^6 cells/vial
小腦顆粒細胞 英文名稱：HCGC 規(guī)格:1 x 10^6 cells/vial
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產品屬于：
產品名稱：小鼠精原細胞系
產品英文：GC-1 spg
貨號：FS-01X9636
細胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài)：貼壁生長
產品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）37
運輸溫度（℃）：常溫
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒 Human Vascuolar cell adhesion molecule 1，VCAM-1 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor β，TNF-β ELISA Kit
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 Human Tumor necrosis factor α，TNF-α ELISA Kit
人轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Human Transforming Growth factor β1，TGF-β1 ELISA Kit
人轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒Human transforming growth factor α，TGF-α ELISA Kit
人干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒Human Stem cell factor/mast cell growth factor，SCF/MGF ELISA Kit
人可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand，sCD40L ELISA Kit
人可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand，sCD30L ELISA Kit
人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA試劑盒Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA Kit
人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor AB，PDGF-AB ELISA Kit
人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α，PDGFsR-α ELISA Kit
人巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒Human Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA Kit
人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA Kit
人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒Human L-Selectin ELISA Kit
人白介素9(IL-9)ELISA試劑盒Human Interleukin 9，IL-9 ELISA Kit
人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 Human Interleukin 8，IL-8 ELISA Kit
人白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 Human Interleukin 6，IL-6 ELISA Kit
人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒Human Interleukin 5，IL-5 ELISA Kit
人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒Human Interleukin 4，IL-4 ELISA Kit
小鼠精原細胞系GAPDH(3E12)-Loading Control 3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內參抗體) 0.1ml
GAPDH 3-磷酸甘油醛脫氫酶抗體(內參抗體) 0.1ml
beta-Actin (Loading Control) β-肌動蛋白抗體（內參抗體） 0.1ml
14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon) 14-3-3蛋白抗體 0.1ml
phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58) 磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml
14-3-3 family protein 蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml
GLI1/Zfp5 腦膠質瘤相關蛋白抗體（鋅指蛋白5） 0.1ml
Involucrin 囊包蛋白/內披蛋白抗體 0.2ml
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
