培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱(chēng):姬姆薩染色液(Giemsa stain,即用型)
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:100ml|500ml
貨號(hào):FS-X10094
產(chǎn)品介紹:
用途: 血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動(dòng)物寄生蟲(chóng)等染色 注意事項(xiàng): 細(xì)胞核呈紫紅色或藍(lán)紫色,胞漿呈粉紅色,無(wú)需磷酸鹽緩沖液,直接使用。 儲(chǔ)存條件:室溫,24個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
黑曲霉磷化DDX58抗體Human SPOPL (Speckle-type POZ protein-like) 人白介2(IL-2)免疫試劑盒
球孢白僵菌磷化DDX58抗體Human SPTA1 (Spectrin alpha chain, erythrocytic 1) 人白介1受體樣1(IL1RL1)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化結(jié)蛋白抗體Human SMTN (Smoothelin) 人白介1受體相關(guān)激-4(IRAK-4)免疫試劑盒
微桿菌屬磷化結(jié)蛋白抗體Human SP1(Transcription factor Sp1) 人白介1受體相關(guān)激1(IRAK1)免疫試劑盒
產(chǎn)堿假單胞菌二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human SLC23A1 (Solute carrier family 23 member 1) 人白介1受體拮抗劑(IL1Ra)免疫試劑盒
宋內(nèi)氏志賀氏菌51592多巴受體D2抗體Human SRM (Spermidine synthase) 人白介1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)免疫試劑盒
謝瓦曲霉多巴受體D1抗體Human GPLD1(Phosphatidylinositol-glycan-specific phospholipase D) 人白介1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)免疫試劑盒
*蜜環(huán)菌多巴受體相互作用蛋白1抗體Human SMS (Spermine synthase) 人白介1β轉(zhuǎn)換(ICE)免疫試劑盒
紫穗槐根瘤菌凋亡相關(guān)蛋白激1抗體Human SLC18A3 (Vesicular acetylcholine transporter) 人白介-1β前體(Pro-IL-1β)免疫試劑盒
白地霉凋亡相關(guān)蛋白激2抗體Human SON (Protein SON) 人白介1β前體(pro-IL1B)免疫試劑盒
魯氏不動(dòng)桿菌多巴、cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體Human SMPD2 (Sphingomyelin phosphodiesterase 2) 人白介1β(IL-1β)免疫試劑盒
繩狀籃狀菌磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)磷蛋白抗體Human SLC2A8 (Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 8) 人白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
青霉菌磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體Human SGMS2 (Phosphatidylcholine:ceramide cholinephosphotransferase 2) 人白介19(IL-19)免疫試劑盒
乳乳球菌乳脂亞種磷化雙皮質(zhì)抗體Human SLC2A8 (Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 8) 人白介18結(jié)合蛋白(IL-18BP)免疫試劑盒
球孢鏈霉菌高加索變種磷化Disabled 1抗體Human SORT1(Sortilin) 人白介18(IL-18)免疫試劑盒
產(chǎn)短桿菌磷化Disabled 1抗體Human SGMS2 (Phosphatidylcholine:ceramide cholinephosphotransferase 2) 人白介17F(IL-17F)免疫試劑盒
微球菌Micrococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml七葉皂C
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml七葉皂B
: ivcas7.00615資源名稱(chēng): 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml七葉皂A
姬姆薩染色液(Giemsa stain,即用型)木犀青霉 3-苯乙炔硫氧化還原蛋白
葡萄球?qū)?/span> 3-乙炔線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物I
丁香假單胞 二基硅烷線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物II
馬來(lái)西亞鏈霉 3,6-壬二烯(異構(gòu)體的混合物)線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物III
鮑氏桑黃 2-乙炔苯線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合物IV
黃曲霉 5-溴-2-氟吡啶總抗氧化能力
大豆慢生根瘤 2,5-二溴三氟甲苯超氧陰離子
漢遜德巴利酵母 3-羥基異喹啉總蛋白
糙孢曲霉 芐基二苯基膦總蛋白
鏈格孢 三環(huán)戊基膦核孤兒受體4A1
貝形側(cè)耳、鷹翅 化鈀9-順式環(huán)氧類(lèi)胡蘿卜雙加氧
考克氏 對(duì)甲酯9-順式環(huán)氧類(lèi)胡蘿卜雙加氧
構(gòu)巢曲霉 硫鈰水合物內(nèi)源
產(chǎn)氨棒桿 L(-)-阿洛糖β-胡蘿卜羥化
核盤(pán) Fmoc-N'-三氟乙?;?L-賴(lài)擴(kuò)展蛋白
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)