產品介紹:
用途: 緩慢組織脫鈣液 注意事項: 主要由50%甲酸、福爾馬林等組成。 儲存條件:室溫,12個月 |
中文名稱:JYBL-Ⅳ脫鈣液
英文名稱:
產品規(guī)格:500ml
貨號:FS-X9994
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
銹赤蠟黃鏈霉菌12號染色體開放閱讀框54抗體Human MFN2(Mitofusin-2) 降解產物(FDP)免疫試劑盒
慢生根瘤菌磷化鈣調節(jié)抗體Human ILDR2(Immunoglobulin-like domain-containing receptor 2) 維蛋白原α鏈(FGA)免疫試劑盒
釀酒酵母分裂相關蛋白CSTF64抗體Human NPY(Neuropeptide Y) 人白原(Fb)免疫試劑盒
泡盛曲霉磷化分裂相關蛋白CSTF64抗體Human VDAC1(Voltage-dependent anion-selective channel protein 1) 人纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒
馬沙門氏菌磷化分裂相關蛋白CSTF64抗體Human TP53 antibody(p53 antibody) 人纖溶原(Plg)免疫試劑盒
白黃馬賽菌CD3抗體Human Galactose-Deficient IgA1(Galactose-Deficient IgA1) 人纖溶抗纖溶復合物(PAP)免疫試劑盒
黃曲霉CD4抗體Human ENK(Enkephalin) 人纖溶/纖維蛋白溶(PL/Fbn)免疫試劑盒
芽孢桿菌白共同抗原抗體Human β-actin(Beta actin) 人纖連蛋白(FN)自身抗體免疫試劑盒
布魯塞爾德克酵母白共同抗原抗體Human AA(Arachidonic Acid) 人纖連蛋白(FN)免疫試劑盒
食有機物深海芽孢桿菌白共同抗原抗體Human MBP(myelin basic protein) 人纖調蛋白(FMOD)免疫試劑盒
卡門柏青霉間隙連接蛋白36抗體Human ACP(Acid phosphatase) 人細小病B19(B19V)抗體(IgM)免疫試劑盒
Methylibium12號染色體開放閱讀框61抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) 人周期A2(Cyclin-A2)免疫試劑盒
釀酒酵母12號染色體開放閱讀框63抗體Human CHAT(Choline O-acetyltransferase) 人周期蛋白依賴性激2(CDK2)免疫試劑盒
毛栓孔菌12號染色體開放閱讀框68抗體Human HbsAg(hepatitis B virus Surface Antigen) 人周期蛋白A1(CCNA1)免疫試劑盒
類芽孢桿菌屬角蛋白15抗體Human IMPDH2(Inosine 5′-Monophosphate Dehydrogenase 2) 人因子信號轉導抑制因子3(SOCS-3)免疫試劑盒
氧化節(jié)桿菌1號染色體開放閱讀框103抗體Human TPAb(Treponema pallidum antibody) 人因子信號轉導抑制因子1(SOCS-1)免疫試劑盒
木防已盤多毛孢Pestalotia│cocculi 質量規(guī)格:BSD二聚體試劑盒光翠雀堿
菌核青霉Penicillium│sclerotiorum 質量規(guī)格:>98%,BCDNA拓撲異構1試劑盒枸櫞
稀褶黑菇Russula│nigricans (Bull.) Fr. 質量規(guī)格:>98%,BRDNA損傷誘導轉錄因子4樣蛋白試劑盒狗牙花堿D乙
JYBL-Ⅳ脫鈣液粗皮馬勃 Baricitinib亞甲基四氫脫氫1
釀酒酵母 Lafutidine促吞噬肽
紫紅曲霉 內皮-1DNA聚合δ1
蘇云金芽胞桿 AZD6482Na+?;悄懝厕D運多肽
金龜子假絲酵母 CZC24832尼克酰腺二核磷氧化5
水冷源橙色單胞 Cabozantinib malate (XL184)低氧誘導因子-1β
阿木氏鏈霉 Cidofovir白介38抗體
香菇 CalcipotriolCD27分子
釀酒酵母 RaltitrexedDeltaFosB
全食副球 Mosapride Citrate異戊烯基腺核
類產堿假單胞 CI994 (Tacedinaline)生長調節(jié)致癌基因γ
啤酒酵母 KY02111球蛋白k可變1D-13
蕈青霉 Dacomitinib (PF299804, PF299)CD109分子
草菇 Proinsulin C-Peptide (55-89) human肝-血小板因子4復合物IgG抗體
Pelagibacterium BIX 02188α羥丁