培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:煌焦油藍染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9918
產(chǎn)品介紹:
用途: 煌焦油藍染色液,主要用于網(wǎng)織紅細胞活體染色 注意事項: 背景清楚,顏色鮮亮 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
高加索鏈霉菌β-乳球蛋白抗體Human HBA1 小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)免疫試劑盒
Salinicoccus alkaliphilusβ-乳球蛋白抗體Human HERPUD2 小鼠鈣非依賴型磷脂A2(iPLA2)免疫試劑盒
Pilidium concavum緩激肽B2受體抗體Human HEATR4 小鼠鈣調(diào)(CAM)免疫試劑盒
金頂側(cè)耳(榆黃蘑)丁酰酯抗體(N端)Human HES5 小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒
褐球固氮菌丁酰酯抗體(C端)Human HESX1 小鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫試劑盒
釀酒酵母BLAME抗體Human HEBP2 小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒
竹喙球菌巴曲霉單克抗體Human HEBP1 小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)免疫試劑盒
釀酒酵母蛇巴曲抗體Human HECTD1 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒
粉肉色杯傘溴脫氧尿抗體Human HECTD2 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒
越南芽孢桿菌腫瘤/抗原2.2抗體Human HECTD3 小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)免疫試劑盒
腸球菌屬腫瘤/抗原2.3抗體Human HELB 小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒
互生枝頂孢腫瘤/抗原2.4抗體Human HDAC5 小鼠肥大類(MCT)免疫試劑盒
解鳥拉烏爾菌腦鈉/利鈉肽抗體Human HDAC4(Histone deacetylase 4) 小鼠肥大/干生長因子受體(試劑盒/Sl/CD117)免疫試劑盒
香菇B Raf抗體Human HDAC6 小鼠芳香免疫試劑盒
腐皮鐮孢菌癌易感基因1抗體Human HAUS3 小鼠二?;视?DAG/DG)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌癌易感基因2抗體Human HAX1 小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒
圣格奧爾根菌Georgenia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRγ干擾受體試劑盒蘇木
普拉霍瓦富鹽菌Haloferax│prahovense 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRγ干擾試劑盒商陸皂元
匍枝根霉Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRγ干擾試劑盒R-三七皂R2
煌焦油藍染色液豬丹絲 3-苯酮狀瘤病16型
卵孢木霉 異丁肉桂酯狀瘤病18型
蠟狀芽孢桿 丁苯乙酯鐵過氧化物岐化
聚生殼 2-氨基嘧啶-5-前血小板堿性蛋白
伊平屋橋大洋芽孢桿 3-叔丁基己二泛蛋白連接E3成分N-識別蛋白1
頂青霉 鄰甲基肉桂肝生長因子受體
耐久腸球 4'-溴苯酮拓撲異構(gòu)Ⅱ
豇豆慢生根瘤 丁芐酯抗新喋呤抗體
硫磺 2-甲基-3-吡咯甲乙酯硫角質(zhì)
根瘤 異丁苯甲酯親核α2
Leminorella richardii 2-溴-4-DNAⅠ樣蛋白3
硝孢鏈霉 4-甲砜基苯乙酮Sorbin和含SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白2
色串孢屬 高銅(II)六水合物增殖誘導配體
噬尼古丁節(jié)桿 水楊酰肼肽抑制劑16
直立枝孢 左乙抑癌基因Beclin1
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)