中文名稱:紅色標(biāo)本保色液Ⅰ
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
貨號(hào):FS-X10208
產(chǎn)品介紹:
注意事項(xiàng): 由、甘油等組成。在制作保色浸制標(biāo)本后,瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴(yán)實(shí),并避免陽(yáng)光直射。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
細(xì)枝孢甘脫羧P蛋白抗體Human THRSP 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒
耐輻射奇球菌核孔蛋白GLE1抗體Human SIRT7(NAD-dependent deacetylase sirtuin-7) 大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒
交替紅色桿菌屬腎小球上皮蛋白1抗體Human THTPA 大鼠免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒
柱孢菌屬轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體Human THUMPD3 大鼠免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
小棱盤菌麥角蛋白抗體Human TICAM2 大鼠免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體Human TIGD5 大鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
溶淀粉類芽孢桿菌糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移1抗體Human THUMPD1 大鼠絡(luò)(TYR)免疫試劑盒
油菜菌核病菌谷酰酰水解抗體Human TIGD1 大鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)免疫試劑盒
乳白耙菌糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移2抗體Human TIMELESS(Protein timeless homolog) 大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒
大腸埃希菌糖基轉(zhuǎn)移28家族1抗體Human THOC7 大鼠卵泡抑(FS)免疫試劑盒
東方伊薩酵母糖基轉(zhuǎn)移6結(jié)構(gòu)1抗體Human TIMM10 大鼠膽固?;D(zhuǎn)移(LCAT)免疫試劑盒
貝酵母膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2抗體Human THOC6 大鼠硫氧還蛋白還原(TrxR)免疫試劑盒
黑曲霉磷化糖皮質(zhì)激受體抗體Human THRAP3 大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)免疫試劑盒
香菇葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體Human Thrombospondin 3 大鼠硫乙酰肝蛋白多糖2(HSPG2)免疫試劑盒
明尼蘇達(dá)被毛孢糖皮質(zhì)激受體β抗體Human SIRT7(NAD-dependent deacetylase sirtuin-7) 大鼠硫類肝(HS)免疫試劑盒
武夷小單孢菌胰島葡萄糖6磷2抗體Human TINP1 大鼠流行性乙型腦炎(JE)抗體(IgG)免疫試劑盒
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC)芳樟
施氏微桿菌Microbacterium│schleiferi 質(zhì)量規(guī)格:柱層析用蓮心堿
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:柱層析用,200-400目蓮心堿高鹽
紅色標(biāo)本保色液Ⅰ枯草芽胞桿 2-氨基十六烷環(huán)磷腺
多毛孢 3,5-二溴三氟甲苯磷脂
豇豆慢生根瘤 2,3-二苯甲酰干擾誘導(dǎo)蛋白1
香菇(L087) 3-溴三氟甲苯白三烯
Marisediminicola 2-溴-5-氟三氟甲苯顆粒蛋白前體
蘇云金芽孢桿松蠋亞種 3-溴-2-白介38
產(chǎn)克雷伯氏 溴乙酯巨噬炎性蛋白
玉蜀黍赤霉 2-甲基巰基-4-氨基嘧啶-5-甲乙酯甘油一酯
螺卷毛殼(只確定屬) 3-基-1,2-抗甲狀腺過(guò)氧化物抗體
松口蘑 芴甲氧羰基-L-高精膽
谷棒桿 2-氨基-1,3,4-噻二唑短鏈脂肪
秦氏蜜環(huán) 2-溴-1,4-二氟苯Klotho蛋白
枯草芽孢桿 4-氨基苯甲脒鹽鹽3β羥基類固脫氫
黑曲霉 2'-氟乙酰苯17β羥基類固脫氫
栗酒裂殖酵母 磷氫二P450側(cè)鏈裂解