英文名稱:Linsitinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10469
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Linsitinib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Linsitinib是一種選擇性的IGF-1R抑制劑,IC50值為35nM,也適度地作用于InsR,IC50值為75nM;對Abl,ALK,BTK,EGFR,F(xiàn)GFR1/2,PKA等沒有作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:867160-71-2 別名:OSI-906 純度:99.69% 分子量:421.49 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
香栓孔菌RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白C抗體Anti-Desmin Antibody載脂蛋白L4(APOL4)
加州鏈霉菌R-鈣粘附分子抗體Anti-DGAT1 Antibody載脂蛋白L3(APOL3)
木賊鐮孢ras癌基因家族RAB8B抗體Anti-DGCR8 Antibody載脂蛋白L2(APOL2)
嗜堿海螺菌Ras樣蛋白B抗體Anti-DGKZ/DGK-zeta Antibody載脂蛋白H(APOH)
膠紅酵母視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白p130抗體Anti-DHODH Antibody(PB1112)載脂蛋白F(APOF)
枯草芽胞桿菌維甲誘導(dǎo)蛋白17抗體Anti-DHX9 Antibody載脂蛋白E(APOE)
蘋果鏈格孢菌RAN GTPase激活蛋白1抗體Anti-DHFR Antibody(PB0133)載脂蛋白D(APOD)
大腸埃希菌減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體Anti-DHX15 Antibody載脂蛋白C4(APOC4)
盤長孢狀盤孢視黃脫氫2型抗體Anti-DICER1 Antibody載脂蛋白C3(APOC3)
金黃亞種再生基因蛋白4抗體Anti-DIO1 Antibody載脂蛋白C2(APOC2)
卡利比克邁耶氏酵母受體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體Anti-DIABLO Antibody載脂蛋白C1(APOC1)
季也蒙畢赤酵母G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白21抗體Anti-DIS3 Antibody載脂蛋白B48(APOB48)
茶炭疽病再生基因蛋白4抗體Anti-DISC1 Antibody載脂蛋白B100(APOB100)
枯草芽孢桿菌受體相互作用蛋白激1抗體Anti-DISC1 Antibody載脂蛋白B(APOB)
大腸埃希氏菌(大腸桿菌)RB1的誘導(dǎo)卷曲蛋白RB1CC1抗體Anti-DKK1 Antibody載脂蛋白A5(APOA5)
綠僵菌環(huán)指蛋白211抗體Anti-DLD Antibody載脂蛋白A4(APOA4)
人蒼白桿菌Ochrobactrum│anthropi 質(zhì)量規(guī)格:含量97%-103%,標(biāo)準(zhǔn)品
紅褐曲霉Aspergillus│rutilans 質(zhì)量規(guī)格:>97%
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
IGF-1R抑制劑(Linsitinib)歧異假絲酵母 1-己基-3-甲基咪唑六氟磷鹽血清反應(yīng)因子
黑曲霉 乙烯基磺鈉肝吸蟲
旋毛殼 1H,1H,2H-全氟-1-十二烯沙門氏抗體
黃暗青霉 芐氧乙視紫質(zhì)
雅致小克銀漢霉 3-巰基異辛酯酪羥化
固氮 5-溴噻唑癌標(biāo)志物-CA153
繩狀青霉 2-噻唑糖類抗原199
大腸埃希氏 2-溴-5-硝基噻唑克拉拉蛋白
黑曲霉 4-硝基咪唑白介36α
褐囊蜜環(huán) 2-氨基-5-溴噻唑糜蛋白
堆形艾美耳球蟲 (S)-(-)-3-叔丁基氨基-1,2-血紅氧合1
小鵝瘟陽性血清參考品(檢驗(yàn)用) 新亞銅試劑鹽鹽一水合物支鏈氨基轉(zhuǎn)氨
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 2,6-二羥基支鏈α-酮脫氨
枯草芽孢桿 1-乙酰基-5-溴-4--3-乙酯蛋腺轉(zhuǎn)移
蠟狀芽孢桿 6,13-五并苯醌3-琥珀酰轉(zhuǎn)移1