產(chǎn)品介紹:
用途: 用于精子頭部DNA檢測,評估精子受精能力。 注意事項: 含有雙鏈DNA的精子才有受精能力。熒光染料橙與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出綠色熒光,與單鏈DNA結(jié)合則發(fā)出紅色或黃色熒光。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
中文名稱:精子核DNA染色液(AO法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:20T
貨號:FS-X9943
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
白色勞瑟爾氏菌色b5還原3抗體Human FHL1 豚鼠25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌CWC22蛋白抗體Human FGFR1OP2 兔ELSIA試劑盒
三峽1號(平菇類)9號染色體開放閱讀框95抗體Human FHL3 兔組織因子途徑抑制物(TFPI)免疫試劑盒
綿皮臥孔菌(可訂購)19號染色體開放閱讀框67抗體Human FEV 兔子組織因子(TF)免疫試劑盒
葡萄座腔菌磷化酪蛋白激1γ1+γ2+γ3抗體Human FGF13 兔子組織型纖溶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒
鹽單胞菌原卟啉氧化3抗體Human FHL2 兔子組織多肽抗原(TPA)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌間隙連接蛋白43抗體Human FGF18 兔子組(HIS)免疫試劑盒
綠色木霉緊密連接蛋白25抗體Human FBXO3 兔子總堿性磷(TALP)免疫試劑盒
榛黃假單胞菌中心體蛋白78抗體Human FGF16 兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒
大腸桿菌6號染色體開放閱讀框146抗體Human FGF17 兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒
釀酒酵母6號染色體開放閱讀框154抗體Human FDFT1 兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌9號染色體開放閱讀框16抗體Human FBXO41 兔子中性粒彈性蛋白(NE)免疫試劑盒
鏈霉菌屬9號染色體開放閱讀框78抗體Human FBXO43 兔子脂聯(lián)(ADP)免疫試劑盒
長枝木霉9號染色體開放閱讀框79抗體Human FBXO6 兔子脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒
植物乳桿菌植物亞種9號染色體開放閱讀框84抗體Human FBXW2 兔子脂蛋白磷脂A2(Lp-PLA2)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌9號染色體開放閱讀框85抗體Human FBXO2 兔子粘蛋白1(MUC1)免疫試劑盒
金黃色亞種Staphylococcus│aureus subsp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%α/β干擾受體試劑盒羥基檸檬
: Bt0249資源名稱: 蘇云金芽胞桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRZ-DNA結(jié)合蛋白1試劑盒
白僵菌Beauveria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRWnt-3a蛋白試劑盒派利文堿
精子核DNA染色液(AO法)類干酪乳桿 2,6-二氟-3-甲基芐網(wǎng)鈣蛋白2
灰黃青霉 2,3-二氟-4-甲基芐鱗狀上皮癌抗原2
谷棒桿 1-(2,6-二氟-3-基)乙酮砷劑3-氧化位甲基轉(zhuǎn)移
釀酒酵母 3--4-氟-DL-苯基甘Trim29分子
香菇屬 6--2-氟-3-乙粒鈣蛋白
少孢酵母 3-氨基噠鹽鹽纖維蛋白肽B
*雞油都不能訂購 6--2-氟-3-甲基芐鈉膽汁協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白
突臍蠕孢 3--2,6-二氟苯鈉膽汁協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白
雀黃鏈霉 4-溴-2--6-氟苯甲E3泛連接
鏈格孢 (3--2-氟苯基)甲上皮類癌相關(guān)抗原
克魯斯假絲酵母 (S)-(+)-alpha-甲氧基巨噬移動抑制因子抗體
楊齒白木層孔 9-氧雜-1-氮雜-蒽環(huán)氧合2抗體
大腸桿 (R)-3-氨基-氮雜庚烷-2-酮鹽鹽二?;视?/span>
淡紫擬青霉 2--6-甲氧基苯并噻唑葡萄糖6磷異構(gòu)
菜豆間座殼 5-溴-2--1,3-二谷半胱連接