培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱:瑞氏染色液(即用型)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml|500ml
貨號(hào):FS-X9855
產(chǎn)品介紹:
產(chǎn)品簡(jiǎn)介: 瑞氏染色液(即用型)是采用優(yōu)質(zhì)試劑原料和經(jīng)典配方配制,主要用于血液和骨髓涂片、細(xì)菌等染色。 儲(chǔ)存條件:室溫密封保存。 有效期:一年。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
Drospirenone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tigecycline整合αM/巨噬表面分子抗體包裝10g
Dutasteride(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tigecycline血小板內(nèi)皮黏附分子-1抗體包裝50g
Epinephrine hydrochloride(標(biāo)...英文名: Tilmicosin血小板內(nèi)皮黏附分子1抗體包裝1g
Estradiol Benzoate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: TilmicosinCD34抗體包裝25MG
Estradiol Cypionate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Timolol MaleateCD36抗體包裝100ml
Estradiol Enanthate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Timolol Maleate凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體包裝25ml
Estradiol Valeate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tinidazole凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體包裝5g
Estriol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tinidazole凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝25g
Estrone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tobramycin Base4號(hào)染色體開放閱讀框34抗體包裝5g
Ethiny Estradiol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tobramycin Base酪蛋白激1γ3/CKI γ3抗體包裝25g
Ethisterone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tobramycin Sulfate凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體包裝5g
Etoposide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tobramycin Sulfate膽固氧化抗體包裝250mg
Fasudil hydrochloride(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tolnaftate半胱蛋白蛋白14抗體包裝1g
Fenofibrate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Topotecan HCl半胱蛋白蛋白5抗體包裝5g
Fenofibric acid(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Topotecan HCl豬瘟病抗體包裝1g
: Z332資源名稱: 傷門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR血栓A2試劑盒g(shù)薟精;Darutigenol
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血栓前體蛋白試劑盒β-細(xì);β-Asarone
美澳型核果褐腐病菌Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0% ,合物血清淀粉樣蛋白P試劑盒a-細(xì)辛;a-Asarone
瑞氏染色液(即用型)土庫(kù)曼鹽土生古 7-溴-1-異喹啉半胱蛋白3
皺孢鏈霉 4-嗎啉基芐S轉(zhuǎn)移π1
枯草芽孢桿枯草亞種 2-乙?;?5-溴吡啶S轉(zhuǎn)移π1
釀酒酵母 3--4-硝基茴香蛋白激R
發(fā)酵乳桿 2--4-甲可溶性EPO受體
德沃斯氏 3--4-甲肝臟甘油三脂脂肪
枯草芽孢桿 4-溴-2-氟苯磺酰結(jié)核分枝桿
產(chǎn)色鏈霉 3-基-4-氟苯膜聯(lián)蛋白-A3
大腸埃希氏桿 3-氨基-2-甲基水合物1-羥基芘
解淀粉芽孢桿 2-氨基-3-基-4,5-二甲基吡咯乙酰肝硫鹽
小鏈霉 酞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體
米根霉 2-(十八氧基)乙梅螺旋體IgM抗體
大腸埃希 2-氨基-3-基-4,5-二甲基吡咯梅螺旋體Igg抗體
芽孢桿 酞信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5
草色串孢 2-(十八氧基)乙磷化信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)