英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
貨號(hào):FS-X9939
產(chǎn)品介紹:
用途: 軟骨染色,主要顯示羥基酸性粘液物質(zhì) 注意事項(xiàng): 主要由酸化液、Alcian 染色液(PH2.5)組成。染色結(jié)果為:酸性黏蛋白呈藍(lán)色,細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
枯草芽孢桿菌B淋巴淋巴瘤因子9抗體Human FREM1 豚鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌膽綠還原抗體Human Frizzled 8 豚鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物(PAP)免疫試劑盒
干酪乳桿菌BIVM蛋白抗體Human FRS3 豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)免疫試劑盒
煙曲霉血型Lewis A抗原抗體Human Frizzled 7 豚鼠嗜性粒陽離子蛋白(ECP)免疫試劑盒
耐輻射奇球菌粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移3抗體Human Frizzled 10 豚鼠生長(zhǎng)激(GH)免疫試劑盒
橢孢小隔指孢Bloom綜合征相關(guān)蛋白抗體Human Frizzled 9 豚鼠腎(Renin)免疫試劑盒
蠶豆葡萄孢骨形態(tài)發(fā)生蛋白8b抗體Human FRK 豚鼠神經(jīng)蛋白聚糖(NCAN)免疫試劑盒
肉色諾卡氏菌磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體Human FOXD4 豚鼠前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒
弗氏檸檬桿菌磷化促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體Human FOXQ1 豚鼠皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌168B淋巴特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體Human FOXP4 豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
球孢毛霉核糖體合成蛋白BOP1抗體Human FOXD4L6 豚鼠內(nèi)皮1(ET-1)免疫試劑盒
類芽胞桿菌調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激BORA抗體Human FOXE3 豚鼠免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
腐霉萊姆病螺旋體抗體Human FOXG1 豚鼠免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體Human FOXH1 豚鼠免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
側(cè)耳伸長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白抗體Human FOXL2 豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌特異性堿性蛋白Y2抗體Human FOXO4 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)免疫試劑盒
: 馴Yu資源名稱: 瓊氏不動(dòng)桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRαN已?;咸窃噭┖袣浠⑵瑝A
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRαL巖藻糖試劑盒7-羥基-5,8-二氧基黃烷
季也蒙畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRαL艾杜糖試劑盒10-羥基攀援山橙堿
軟骨染色液(阿利新藍(lán)法,pH2.5)寄生孢 2-苯氨基-3-甲基-6-二丁氨基熒神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2
解藻?。ㄈ茉寤。?/span> 2-吡-3-羧莫氏立克次體IgG抗體
巨獸芽孢桿 1,3,3-基-奈諤普氏立克次體IgG抗體
枯草芽孢桿 二(5-氨基-2-羥苯基)--二鹽兔熱病IgG抗體
釀酒酵母 3H-1,2,3-三唑并[4,5-C]吡啶兔熱病IgM抗體
浸麻類芽孢桿 3,5-二-4-氟苯森林腦炎
化妝品 落總數(shù) 2-氨基-6-甲基-4-基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-5-酮蜱傳腦炎病IgG抗體
枯草芽孢桿 3-氨基-6-吡-2-甲蜱傳腦炎病IgM抗體
短芽孢桿 1-甲基-1H-吡唑-5-甲抗α-烯化抗體
肺炎鏈球 1-甲基-1H-吡唑-3-甲神經(jīng)穿透1
畢赤酵母 唑輸血傳播病;辛型肝炎病
乳桿屬 d-十四內(nèi)酯柯薩奇病IgG抗體
赭曲霉 4--3-基吡啶柯薩奇病IgM
戈盧別夫氏酵母 間茴香鹽鹽柯薩奇病IgA
海棲鏈格孢 4,4'-二疊氮-磺二鈉鹽四水合物阿巴