培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml
貨號:FS-X10131
產(chǎn)品介紹:
用途: 乙肝病毒/HBV染色 注意事項: 特異性高,但染色效果易受原料影響,不穩(wěn)定。HBsAg陽性物質(zhì)呈棕紅至深棕色,背景呈淺淡灰棕色肝細胞核不著色。肝細胞內(nèi)脂褐素也呈深棕色。 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化表皮生長因子受體抗體Human PGR(Progesterone receptor) 犬促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
木耳Au888磷化表皮生長因子受體抗體Human FSCB (Fibrous sheath CABYR-binding protein) 犬促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)免疫試劑盒
彩色豆馬勃磷化表皮生長因子受體抗體Human FSIP1 (Fibrous sheath-interacting protein 1) 犬促卵泡(FSH)免疫試劑盒
暗擬莖點霉*磷化表皮生長因子受體抗體Human ARSD(Arylsulfatase D) 犬促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒
黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX1 (Homeobox even-skipped homolog protein 1) 犬雌激(E)免疫試劑盒
圍小叢殼菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬雌二(E2)免疫試劑盒
球孢白僵菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬成纖維生長因子23(FGF23)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHSD2 (F-BAR and double SH3 domains protein 2) 犬不對稱二甲基精(ADMA)免疫試劑盒
青霉屬磷化表皮生長因子受體抗體Human SLC30A3(Zinc transporter 3) 犬表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒
耐堿馬賽菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EWSR1 (RNA-binding protein EWS) 犬表達于SiSo系的受體結(jié)合型腫瘤抗原(EBAG9)免疫試劑盒
炭黑曲霉磷化表皮生長因子受體抗體Human FCHO1 (F-BAR domain only protein 1) 犬半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)免疫試劑盒
黑附球菌磷化表皮生長因子受體抗體Human EXO5 (Exonuclease V) 犬白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
八孢裂殖酵母磷化表皮生長因子受體抗體Human EXTL1 (Exostosin-like 1) 犬白介7受體(IL7R)免疫試劑盒
弗雷德里克斯堡假單胞菌磷化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體Human FCHO2 (F-BAR domain only protein 2) 犬白介6(IL-6)免疫試劑盒
小奧德蘑磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human FCGR2C (Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-c) 犬白介4(IL-4)免疫試劑盒
三骨菇磷化轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體Human EVX2 (Homeobox even-skipped homolog protein 2) 犬白介2(IL-2)免疫試劑盒
刺孢小克銀漢霉原變種Cunninghamella│echinulata var. echinulata 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品對羥基
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml對羥基
竹喙球菌Ceratosphaeria│phyllostachydis Zhang 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,95%
乙型肝炎病毒染色液(Shikata地衣紅法)枯草芽孢桿 2-芐基烯E3泛連接
漢遜德巴利酵母 5-氨基-2-嘧啶香豆-3-羥化
芽孢桿 芐氧羰基-羥基甘5-氨基酮戊脫水
毛栓孔 4--2-氟芐5-氨基酮戊
貝倫格葡萄座腔梨生專化型 2,4-二氟芐尿卟啉原
滑菇 4,4'-(1,2-二乙基亞乙基)二尿卟啉原合
產(chǎn)黃青霉 1-(4-羥丁基)-4-甲基哌單氧化B
蠟樣芽孢桿 2-(叔-丁基)苯基異酯腐N-甲基轉(zhuǎn)移
彎孢 2-哌酮20S蛋白體
云芝 1-芐基-4-基-4-苯基鹽鹽α-L-巖藻糖
短桿 順式-4-氨基環(huán)己鹽鹽抗壞血過氧化物
Cystofilobasidium 二鹽基性硬脂鉛β-1,3-葡聚糖
致病擬桿 頭孢色P4503A4
糞腸球 2,4-二氨基-6-羥基嘧啶羥甲基戊二單酰
枯草芽孢桿 5,6-二煙甲酯葡萄糖
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)