培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱：巴氏染色試劑盒(EA36)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：400ml
貨號(hào)：FS-X9851
產(chǎn)品介紹:
細(xì)胞中的細(xì)胞核是由酸性物質(zhì)組成，它與堿性染料的親和力較強(qiáng)；而細(xì)胞漿則相反，它含有堿性物質(zhì)和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這一特性對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色性染色，細(xì)胞經(jīng)染色后能清晰地顯示細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，胞質(zhì)透亮鮮麗，各種顆粒分明，細(xì)胞核染色質(zhì)非常清楚，從而較容易發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。通過巴氏染色可反映出細(xì)胞在炎癥刺激下和癌變后的形態(tài)學(xué)變化，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和診斷一些病變和腫瘤具有較重要意義。 巴氏染色法是臨床細(xì)胞學(xué)檢查常用的傳統(tǒng)染色方法，在婦科檢查中，巴氏染色細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌及癌前病變的較常用篩查方法。同時(shí)巴氏染色還可觀察女性激素水平和檢測(cè)生殖道病原體如念珠菌、滴蟲等的感染。其中EA50染液為EA36的改良型，其操作方法與EA36相同。一般認(rèn)為，EA36和EA50 較適用于婦科標(biāo)本，改良EA65染液較常用于非婦科標(biāo)本(如胸、腹水等脫落細(xì)胞)。 儲(chǔ)存條件：室溫密封保存。 有效期：六個(gè)月。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
5-三基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Rifabutin CD83抗體包裝250mg
5-硝基糠二乙酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Rifapentine17號(hào)染色體開放閱讀框59抗體包裝50MG
6-氧基-2-萘乙（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Rifapentine17號(hào)染色體開放閱讀框39抗體包裝25g
6-硫鳥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Riluzole鈣敏感受體1抗體包裝5g
6-疏基（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Riluzole鈣結(jié)合蛋白Calponin抗體包裝1g
7－基去乙酰氧基頭孢烷（7-ADCA）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Deferasirox2號(hào)染色體開放閱讀框44抗體包裝25ml
808猩紅（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Deferasirox2號(hào)染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
Acarbose(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Risperidone2號(hào)染色體開放閱讀框57抗體包裝250mg
Acyclovir(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Risperidone2號(hào)染色體開放閱讀框29抗體包裝25g
Adiphenine HCl(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Ritonavir3號(hào)染色體開放閱讀框21抗體包裝5g
Allylestrenol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Ritonavir1號(hào)染色體開放閱讀框74抗體包裝1g
alpha-亞麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Rosiglitazone base補(bǔ)體C1q和腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白10抗體包裝5g
Altrenogest(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Rosiglitazone base1號(hào)染色體開放閱讀框93抗體包裝100g
Amisulpride(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Rosiglitazone Maleate 1號(hào)染色體開放閱讀框94抗體包裝25g
Anastrozole（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Rosiglitazone Maleate 1號(hào)染色體開放閱讀框96抗體包裝500g
青霉屬Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品血小板活化因子試劑盒羊藿;Icariin
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR，培養(yǎng)級(jí)血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1試劑盒遠(yuǎn)志;Polygalacic acid
不動(dòng)桿菌Acinetobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血纖肽/纖維蛋白肽B試劑盒隱丹參;Cryptotanshinon
巴氏染色試劑盒(EA36)釀酒酵母 2--4-甲氧基嘧啶巨噬激蛋白
米根霉 2--5-甲基嘧啶加氧血紅-1
枯草芽孢桿枯草亞種 4,4-二氟庚二二乙酯21羥化
美澳型核果褐腐病 鹽瓦地那非三水合物21羥化
亞拉巴馬全緣孔 3,3-二甲基哌-2-酮肺表面活性蛋白
腐皮殼 3,5-二
食腺芽生葡萄孢酵母 1-萘肼鹽鹽循環(huán)腫瘤
根瘤 3-氟-4-嗎啉基苯基異酯四環(huán)類
細(xì)鏈格孢 N-甲基-2-戊骨膜蛋白
黃赭色鏈霉 2-萘鹽鹽磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-3
大腸埃希氏 磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD-4
嘴突凸臍蠕孢 2-溴-3--5-硝基吡啶脫氧血紅蛋白
貝倫格葡萄座腔梨生?；?/span> 乙鉍(III) (metals basis)氧合血紅蛋白
黃綠木霉 6-溴-1,2,3,4-四氫喹啉二型高密度脂蛋白
不產(chǎn)色鏈霉 N-苯基氨基乙乙基三型高密度脂蛋白
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
