產(chǎn)品介紹:
注意事項(xiàng): 有硫酸銅、甘油、等組成。如出現(xiàn)沉淀,可過濾后再使用。在制作保色浸制標(biāo)本后,瓶口要用石蠟或者凡士林密封嚴(yán)實(shí),并避免陽光直射。 儲存條件:室溫,12個(gè)月 |
中文名稱:藍(lán)色標(biāo)本保色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×250ml
貨號:FS-X10214
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
布氏假單胞菌法尼基二磷合1抗體Human TCF7L1 大鼠抗單核抗體(AMA)免疫試劑盒
異常威克漢姆酵母鳥核結(jié)合蛋白1抗體Human TCF7 大鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)免疫試劑盒
青霉膠質(zhì)纖維性蛋白GFAPδ抗體Human CD52(CAMPATH-1 antigen) 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)免疫試劑盒
西洋參銹腐病菌β半乳糖抗體Human TCERG1 大鼠抗IVIgG抗體免疫試劑盒
伯頓生絲畢赤酵母巨軸索蛋白GAN抗體Human TCHP 大鼠抗IgE受體抗體免疫試劑盒
煙色曲霉G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體Human TCF12/HEB 大鼠巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒
日本曲霉高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1A抗體Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) 大鼠巨噬炎癥蛋白5(MIP-5)免疫試劑盒
乳乳球菌乳亞種自主生長因子1B抗體Human TBX15 大鼠巨噬炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)免疫試劑盒
釀酒酵母GLCNE蛋白抗體Human TBX18 大鼠巨噬炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
費(fèi)氏檸檬桿菌半乳糖凝集9抗體Human TBX21/T-bet 大鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)免疫試劑盒
豌豆根瘤菌富含亮蛋白LRP130抗體Human TBX22 大鼠巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒
檸檬明串珠菌蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑GBF1抗體Human CD52(CAMPATH-1 antigen) 大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)免疫試劑盒
貝形側(cè)耳高爾基體膜蛋白GP73抗體Human TBX5 大鼠巨噬替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒
釀酒酵母葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human TCF12/HEB 大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒
泡盛曲霉G蛋白結(jié)合蛋白2抗體Human TCEB1 大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒
黑曲霉G蛋白結(jié)合蛋白2抗體Human TCEB3 大鼠精脲水解(AGMAT)免疫試劑盒
生二鏈霉菌Streptomyces│ambofaciens 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品知母皂E
傳染性喉氣管炎病毒Alphaherpesvirinae│Infectious laryngotracheitis virus 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品知母皂B
型副傷門菌Salmonella│paratyphi A 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品白綿馬AP
藍(lán)色標(biāo)本保色液釀酒酵母 1-苯氧基-2-轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2
蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 苯基磷二化物轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1
根瘤 4-氨基-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶硫鹽白蛋白片段257-264
季也蒙假絲酵母 1-N-Boc-4-(4-溴苯基)白蛋白片段257-264抗體
傳染性法氏囊病病 1-N-Boc-4-(4-溴苯基)抗甘露糖受體抗體
芽孢桿屬 過氧硫氫復(fù)合鹽抗CD86抗體
三葉草根瘤 水合硅?;さ鞍?/span>
瓜亡革 4--3-乙酮精加壓受體2
果生鏈核盤 3-溴-4-吡啶白介27
膠凍樣芽胞桿 4-叔丁基苯甘油
*珊瑚(不是這個(gè)) 5-(二氟甲氧基)-2-{[(4--3-甲氧基-2-吡啶基)甲基]硫}-1H-苯并咪唑總氨基
沃氏富鹽 3-三氟P-糖蛋白
鏈霉 D-乳乙酯硫代反應(yīng)物
節(jié)桿屬 1-溴-3-甲氧基烷(3-溴基)線粒體呼吸鏈
維多利亞維希尼克氏酵母 1,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-C]吡唑5脂加氧