產(chǎn)品名稱 | MDBK牛腎細(xì)胞 | 貨號 | A01X1178 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | MDBK:MDBK |
分類 | 牛系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
商品介紹：
別稱 | MDBK (NBL-1) |
種屬 | 牛 |
年齡（性別） | 雄性，成年 |
組織來源 | 腎；正常細(xì)胞 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
詳情簡介 | MDBK(NBL-1)細(xì)胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日從一只表觀正常的成年牛腎臟建立的。1973年，這株MDBK(NBL-1)細(xì)胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染；1982年，發(fā)現(xiàn)了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)細(xì)胞株，此細(xì)胞最初來自ATCC1967年7月第96代的凍存管。MDBK(NBL-1)細(xì)胞的后代經(jīng)NVSL檢測，未發(fā)現(xiàn)被任何病毒污染的證據(jù)。1982年8月，R·A·Van Deusen將MDBK(NBL-1)提供給ATCC時(shí)，已傳代至第110代；M??? |
生物安全等級 | 2 |
生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~35小時(shí) |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣，95%；CO2，5% |
溫度 | 37℃ |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Cy5標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體3抗體 英文名；VEGFR3, Cy5 conjugated維甲酸相關(guān)孤兒受體γt抗體 英文名；ROR gamma T
Cy7標(biāo)記的腱調(diào)蛋白/軟骨調(diào)節(jié)素樣1蛋白抗體 英文名；TNMD, Cy7 conjugated維甲酸相關(guān)孤兒受體γ抗體 英文名；RORC
Cyclin A1相互作用蛋白抗體 英文名；PROCA1維甲酸誘導(dǎo)蛋白14抗體 英文名；RAI14
CYLC2蛋白抗體 英文名；CYLC2維甲酸誘導(dǎo)蛋白16抗體 英文名；RAI16
CYP1A2單克隆抗體 英文名；CYP1A2維甲酸誘導(dǎo)蛋白17抗體 英文名；Retinoic acid induced 17
CYP1A2抗體 英文名；CYP1A2維甲酸誘導(dǎo)蛋白1抗體 英文名；RAI1
CYP27B1單克隆抗體 英文名；CYP27B1維甲酸誘導(dǎo)蛋白3抗體 英文名；RAI3
C端結(jié)合蛋白1抗體 英文名；CTBP1維甲酸誘導(dǎo)蛋白6抗體 英文名；STRA6
C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體 英文名；CRP(C11F2)維甲酸誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤蛋白1抗體 英文名；NAV2
C-反應(yīng)蛋白抗體 英文名；CRP維甲酸早期轉(zhuǎn)錄1G蛋白抗體 英文名；RAET1G
C末端結(jié)合蛋白2抗體 英文名；CTBP2尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子1抗體 英文名；CDX1
C-肽抗體 英文名；C Peptide尾側(cè)型同源轉(zhuǎn)錄因子2/3抗體 英文名；CDX2+3
C型鈉利尿多肽抗體 英文名；NPPC/Atrial natriuretic peptide尾加壓素2相關(guān)肽抗體 英文名；UTS2D
MDBK牛腎細(xì)胞C型凝集素4家族E抗體 英文名；CLEC 4E尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2單克隆抗體 英文名；CDX2
C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族12成員A抗體 英文名；CLEC12A尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體 英文名；CDX2
C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族16成員A抗體 英文名；CLEC16A尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2重組兔單克隆抗體 英文名；CDX2
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。
