產(chǎn)品名稱 | UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞 | 貨號(hào) | A01X1173 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | UMNSAHDF1:UMNSAH/DF-1 |
分類 | 雞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
商品介紹：
別稱 | UMNSAH-DF-1 |
種屬 | 家雞 |
年齡（性別） | 10日齡 |
組織來(lái)源 | 胚胎，自發(fā)永生化 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
詳情簡(jiǎn)介 | UMNSAH/DF-1細(xì)胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細(xì)胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細(xì)胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，傳代直到衰老；在衰老過(guò)程中離心以保持細(xì)胞培養(yǎng)在30%到60%滿；不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說(shuō)明UMNSAH/DF-1細(xì)胞是永生化而沒有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。 |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~22-36小時(shí) |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣，95%；CO2，5% |
溫度 | 39℃（Max.40℃，Min.38℃） |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
CRB2蛋白抗體 英文名；CRB2微管相關(guān)蛋白2單克隆抗體 英文名；MAP2
CRB3蛋白抗體 英文名；CRB3微管相關(guān)蛋白2抗體 英文名；MAP2
CREB3L4單克隆抗體 英文名；CREB3L4微管相關(guān)蛋白4抗體 英文名；MAP4
CREB結(jié)合蛋白p300抗體 英文名；微管相關(guān)蛋白9抗體 英文名；MAP-9
CREB結(jié)合蛋白抗體 英文名；KAT3A / CBP微管相關(guān)蛋白EB家族3抗體 英文名；EBF3
CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 英文名；CRTC3微管相關(guān)蛋白NICN1抗體 英文名；NICN1
CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 英文名；TORC2微管相關(guān)蛋白Tau-4單克隆抗體 英文名；Human Tau
CRISPR/Cas9單克隆抗體 英文名；Cas9微管相關(guān)蛋白Tau-4抗體 英文名；Tau-4
Crk p38抗體 英文名；CRK微管相關(guān)蛋白α6抗體 英文名；TUBA1C
CRMP2單克隆抗體 英文名；CRMP2微管相關(guān)蛋白單克隆抗體 英文名；Tau
CROC4抗體 英文名；CROC4微管相關(guān)蛋白抗體 英文名；Tau
CRX抗體 英文名；CRX1微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體 英文名；LC3C
CRYM蛋白抗體 英文名；mu Crystallin微管相關(guān)蛋白亞型4單克隆抗體 英文名；Tau isoform 4
UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞C-SKI抗體 英文名；SKI微管相關(guān)蛋白樣蛋白3抗體 英文名；EML3
CSMD1抗體 英文名；CSMD1微管相關(guān)末端結(jié)合蛋白2抗體 英文名；EB2
CSMD2蛋白抗體 英文名；CSMD2微管相關(guān)同源蛋白TPX2單克隆抗體 英文名；TPX2
CSMD3蛋白抗體 英文名；CSMD3微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體 英文名；TPX2
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過(guò)大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
