我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X96326 |
商品屬性：
名稱(chēng) 3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 別稱(chēng)3T3 L1; 3T3L1; 3T3-L1 ad; NIH-3T3-L1; NIH3T3-L1 種屬小鼠 年齡（性別）胚胎 組織來(lái)源胚胎 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 背景描述3T3-L1細(xì)胞是通過(guò)克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當(dāng)3T3-L1細(xì)胞從快速分裂到長(zhǎng)滿(mǎn)且接觸抑制時(shí)，3T3-L1細(xì)胞經(jīng)過(guò)前脂肪向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。培養(yǎng)液中，高血清含量可以促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞內(nèi)脂肪的積累。 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM＋10%CS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 受體表達(dá)情況insulin, expressed |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠 PD1 / PDCD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 GREM2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 SIGIRR 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 SERPIND1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 Prostasin / Prss8 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 PIGR 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL33 / NF-HEV 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 IL11 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 SPP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 Pglyrp1 / PGRP 基因全長(zhǎng)ORF克隆
3T3-L1 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)倉(cāng)鼠瘦素(LEP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
倉(cāng)鼠前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
倉(cāng)鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
倉(cāng)鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
倉(cāng)鼠巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
倉(cāng)鼠甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
倉(cāng)鼠極低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
倉(cāng)鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
倉(cāng)鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
倉(cāng)鼠核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
倉(cāng)鼠甘肽過(guò)氧化物3(GPX3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀(guān)察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
