產(chǎn)品介紹:
Pim1/AKK1-IN-1是一種有效的多種酶抑制劑,能夠作用于Pim1/AKK1/MST2/LKB1,Kd值分別為35nM/53nM/75nM/380nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1093222-27-5 別名:LKB1/AAK1 dual inhibitor 純度:98.10% 分子量:339.35 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Pim1/AKK1-IN-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10625
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
缺陷短波單胞菌Cy5.5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS3 Antibody過(guò)氧化7(GPX7)
球毛殼菌Cy7標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS4 Antibody過(guò)氧化5(GPX5)
肉色諾卡氏菌PE標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS3 Antibody過(guò)氧化4(GPX4)
大奇異球菌PE-Cy3標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS5 Antibody過(guò)氧化1(GPX1)
枯草芽孢桿菌PE-CY5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD1 AntibodyS轉(zhuǎn)移ω1(GSTω1)
雙孢鐮孢APC標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD2 AntibodyS轉(zhuǎn)移π1(GSTπ1)
林肯鏈霉菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD1 AntibodyS轉(zhuǎn)移μ2(GSTμ2)
毛頭鬼傘Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD2 Antibody(PB0454)S轉(zhuǎn)移κ1(GSTκ1)
牛奶 三聚Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉(zhuǎn)移θ2(GSTθ2)
新城疫病Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉(zhuǎn)移θ1(GSTθ1)
地下諾爾氏菌PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉(zhuǎn)移α5(GSTα5)
戊糖乳桿菌PE-Cy7標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SORBS1 AntibodyS轉(zhuǎn)移α4(GSTα4)
根瘤菌羅丹明標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-Sorbitol Dehydrogenase/SORD AntibodyS轉(zhuǎn)移α2(GSTα2)
人參地土地桿菌FITC標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SORBS3 AntibodyS轉(zhuǎn)移α1(GSTα1)
食砜節(jié)桿菌膠體金標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOX11 Antibody谷光甘肽合成(GSS)
芭蕉生粘鞭霉堿性磷(AP)標(biāo)記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOX1 Antibody谷轉(zhuǎn)2(ALT2)
生長(zhǎng)抑制蛋白NDN抗體煙色紅曲霉大鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物
鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體溝鯰愛(ài)德華氏菌大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞提取物
神經(jīng)內(nèi)分泌特異性蛋白2抗體變異庫(kù)克菌大鼠角膜成纖維細(xì)胞提取物
神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體相關(guān)蛋白1抗體金灰青霉大鼠角膜上皮細(xì)胞提取物
Pim1/AKK1/MST2/LKB1抑制劑尼氏芽孢桿 馬心脂肪結(jié)合蛋白
樹(shù)舌4-1 酐馬結(jié)合珠蛋白;觸珠蛋白
產(chǎn)二鏈霉 4,4′,4″-三叔丁基-2,2′:6′,2″-三聯(lián)吡啶輔肌動(dòng)蛋白α1
地衣芽孢桿 2-氟-4-三氟甲輔肌動(dòng)蛋白α2
辣椒溶桿 2,5-二氟-4-(三氟甲基)苯轉(zhuǎn)錄激活因子-1
普通變形桿 D-3-轉(zhuǎn)錄激活因子-2
栗疫 L-4-三氟磷脂酰肌蛋白聚糖1
膠孢 BOC-D-3-磷脂酰肌蛋白聚糖4
Sphingobium francense BOC-D-3,4-二苯絡(luò)絲蛋白
奇異酵母 BOC-L-3-緊密連接蛋白
瘤孢梭孢殼 BOC-L-2-苯組織因子
長(zhǎng)枝木霉 BOC-L-2-氟苯組織因子途徑抑制物
蠟葉曲霉 2-羥基-2-(三氟甲基)激錨定蛋白1
南方樹(shù)舌 (R)-(-)-1-苯甲基-3-氨基吡咯烷增殖誘導(dǎo)配體
深褐褶 (1S,2R)-2-(二丁氨基)-1-苯基-1-αL艾杜糖