產(chǎn)品介紹:
用途: 髓鞘染色,石蠟切片 注意事項(xiàng): 染色結(jié)果為:髓鞘呈深綠色,脫髓鞘纖維不著色。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
中文名稱:髓鞘染色液(固綠法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml
貨號:FS-X10065
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
金白F4(金針菇)胰羧肽A6抗體Human 12-LO(Arachidonate 12-Lipoxygenase) 人骨形成蛋白4(BMP4)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌9號染色體開放閱讀框150抗體Human TOR2A(Prosalusin) 人骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒
季也蒙邁耶氏酵母鈣粘附蛋白9抗體Human VHL(Von Hippel-Lindau disease tumor suppressor) 人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)免疫試劑盒
嗜熱脂肪芽胞桿菌鈣粘蛋白15抗體Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) 人骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒
釀酒酵母分子伴侶復(fù)合體TCP-1β抗體Human IDE(Insulin-degrading enzyme) 人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)免疫試劑盒
木豆根瘤菌分裂周期蛋白25C抗體Human LSS(Lanosterol synthase) 人骨橋(OPN)免疫試劑盒
毛瓣雞血藤根瘤菌過敏C4/補(bǔ)體C4抗體Human ECM1(Extracellular matrix protein 1) 人骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)免疫試劑盒
鞘菌屬脂肪結(jié)合蛋白3抗體Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) 人骨膠原交聯(lián)(Cr)免疫試劑盒
腐皮鐮孢16號染色體開放閱讀框48抗體Human APLN36(Apelin-36) 人骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒
平菇色P450 19抗體Human MT2A(Metallothionein-2) 人骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
黃色金黃桿菌CD28抗體Human NRG-1(Neuregulin 1) 人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒
長根小奧德蘑1號染色體開放閱讀框195抗體Human TUBB(Tubulin beta chain) 人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒
亞膜畢赤酵母NK抑制性受體2DL1抗體Human MUCL1(Mucin-like protein 1) 人骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒
繩狀籃狀菌3號染色體開放閱讀框67抗體Human CD3E(T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain) 人骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒
生根根瘤菌κ-酪蛋白抗體Human ERCC1(DNA excision repair protein ERCC-1) 人骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)免疫試劑盒
孢吸水鏈霉菌北京變種唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集7抗體Human NRP1(Neuropilin-1) 人骨保護(hù)(OPG)免疫試劑盒
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.96廣藿香
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品山麥冬皂B
產(chǎn)硫芽孢桿菌Bacillus│thioparans 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰車前草酯
髓鞘染色液(固綠法)吉氏根瘤 2-氟蛋白激A
微球?qū)?/span> 3,5-二-2,4-二氟苯蛋白激G-II型
小托柄鵝膏 1-甲基-1,2,4-三唑絲蛋白HTRA1
阿魏側(cè)耳 氨噻肟乙酯組織谷氨酰轉(zhuǎn)移
大腸桿 2,3-二甲基H3N2流感
巴斯德酵母 2,6-二溴苯血紅蛋白E
彎曲高溫單孢 3,4,6-三噠Ⅰ型血小板反應(yīng)蛋白7A域
桑莖點(diǎn)霉 N-Cbz-D-絲百白破抗體
南方異擔(dān)子 3-溴-2,4,6-三磺基轉(zhuǎn)移
煙曲霉 4-溴--氟苯Preptin蛋白
灰平鏈霉 檸檬鋰肉堿脂酰轉(zhuǎn)移1
枯斑擬盤多毛孢 2,4-二喹唑啉Ⅶ抗體
食氮嗜異生質(zhì) 3-乙氧基-4-甲氧基苯甲核仁蛋白14
漢遜德巴利酵母 3-溴-4-Ki-67蛋白
阪崎腸桿 芐氧基乙Ⅲ型膠原α1