培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱:Weil髓鞘染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:4×50ml
貨號(hào):FS-X10062
產(chǎn)品介紹:
用途: 髓鞘染色,石蠟切片 注意事項(xiàng): 主要由weil蘇木素染液、鐵明礬分化液、Weigert分化液等組成。染色結(jié)果為:髓鞘呈黑色,背景呈無色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
炭黑曲霉9號(hào)染色體開放閱讀框174抗體Human HPX(Hemopexin) 人黑色瘤免疫試劑盒
大腸埃希氏菌6號(hào)染色體開放閱讀框64抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) 人黑色免疫試劑盒
類芽孢桿菌屬免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) 人核因子κB抑制物激β(IKK-β)免疫試劑盒
亞細(xì)亞菌屬透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體Human ARRB2(Beta-arrestin-2) 人核因子κB抑制物激α(IKK-α)免疫試劑盒
東方伊薩酵母周期樣Y1抗體Human CNN1(Calponin-1) 人核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒
根瘤菌周期J抗體Human ProHAMP(Hepcidin prohormone) 人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 免疫試劑盒
青紫鏈霉菌周期L抗體Human MMP28(Matrix metalloproteinase-28) 人核心蛋白聚糖(DCN)免疫試劑盒
北方蜜環(huán)菌補(bǔ)體C1RL鏈多肽抗體Human CBS(Cystathionine beta-synthase) 人核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)免疫試劑盒
釀酒酵母周期M2抗體Human ADAMTS7(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7) 人核糖體蛋白S9(RPS9)免疫試劑盒
鏈霉菌周期T2抗體Human EDA(Ectodysplasin-A) 人核糖體蛋白S25(RPS25)免疫試劑盒
白地霉周期K抗體Human TNC(Tenascin) 人核糖核抑止劑(RNH1/PRI/RNH)免疫試劑盒
天藍(lán)褐鏈霉菌抗菌肽CAMP抗體Human IL36A(Interleukin-36 alpha) 人核糖核,核糖核A家族,(肝臟,嗜性粒源性神經(jīng))(RNASE2)免疫試劑盒
釀酒酵母5號(hào)染色體開放閱讀框4抗體Human HPX(Hemopexin) 人核糖核(RNASE1/RIB1/RNS1)免疫試劑盒
大腸埃希菌4號(hào)染色體開放閱讀框44抗體Human MAPT(Microtubule-associated protein tau) 人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)免疫試劑盒
膠孢4號(hào)染色體開放閱讀框33抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) 人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)免疫試劑盒
pET-23a4號(hào)染色體開放閱讀框42抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) 人核黃激(RFK)免疫試劑盒
Microsphaeropsis arundinisMicrosphaeropsis│arundinis 質(zhì)量規(guī)格:IND紫蘇烯
缺陷短波單胞菌Brevundimonas│diminuta 質(zhì)量規(guī)格:AR;IND苦蒿
立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格:0.9西瑞香
Weil髓鞘染色液鵝膏屬 2,4-二溴精代琥珀合成1
丁香輪絲鏈輪絲 化1-十六烷基-3-甲基咪唑肝堿性磷
土壤小單胞 1,2-二苯分泌磷蛋白2
黑木耳 5--2-拉薩熱病IgG抗體
*喜溫硫桿 2-甲基-5-氨基-2H-四氮唑γ-分泌亞單位
核鏈霉 N,N'-二甲基草酰泛特異性蛋白
腐爛粘束梗霉 2-肼基苯并噻唑?qū)ρ趿?
棒曲霉 2-苯并噁唑癌抗原27-29
球孢白僵 二單乙酯鹽糖類抗原72-4
金9401(金針菇) 順-3-己烯順-3-己烯酯珠蛋白A
名稱 2-氨基噻唑鹽鹽肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1
黃柄曲霉 苯甲酰乙脂酰COA脫氫
黑曲霉 反式-4-甲氧基肉桂異辛酯烯酰-CoA水合
盾殼霉 2-乙氧基苯甲硫解
釀酒酵母 芐基2-萘羥酰CoA脫氫
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)