中文名稱:精子稀釋液(含Trypan Blue,計(jì)數(shù)液)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X9927
產(chǎn)品介紹:
用途: 精子計(jì)數(shù) 注意事項(xiàng): 通過普通顯微鏡觀察 儲存條件:4℃,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
假單胞菌BSPRY蛋白抗體Human GPM6A 小鼠白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
嗜中溫寒冷桿菌BAIAP2L2蛋白抗體Human GPN1 小鼠白介18結(jié)合蛋白(IL-18BP)免疫試劑盒
焦曲霉磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體Human GPR101 小鼠白介18(IL-18)免疫試劑盒
綠色木霉磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體Human GOPC 小鼠白介17(IL-17)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種人β亞基人絨毛膜促性腺激(β HCG)抗體Human GORAB 小鼠白介16(IL-16)免疫試劑盒
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum鈣激活通道蛋白 α 1抗體Human GORASP2 小鼠白介15(IL-15)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種鈣激活通道蛋白 α 1抗體Human GOSR2(Golgi SNAP receptor complex member 2) 小鼠白介13(IL-13)免疫試劑盒
灰葡萄孢蛇巴曲抗體Human GNL1 小鼠白介12(IL-12/P70)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體Human GNL2 小鼠白介12(IL-12/P40)免疫試劑盒
蕈狀芽孢桿菌Bax抗體Human GMPR 小鼠白介11(IL-11)免疫試劑盒
白地霉Bcl-2抗體Human GNPAT 小鼠白介10(IL-10)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體Human GMPS 小鼠白喉IgG抗體免疫試劑盒
發(fā)酵乳桿菌堿性成纖維生長因子抗體Human GNA14 小鼠白蛋白免疫試劑盒
粉紫香蘑癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體Human GNAI1 小鼠氧化(含黃)A(MAOA)免疫試劑盒
干草鞘單胞菌牛血清白蛋白抗體Human GNAQ 小鼠癌胚抗原(CEA)免疫試劑盒
弗吉尼亞鏈霉菌β-酪蛋白抗體Human GNAO1(Guanine nucleotide-binding protein G(o) subunit alpha) 小鼠阿立新A(Orexin A)免疫試劑盒
BCRC13377=DSM43859=IFO14371=KCTC9745=KCTC資源名稱: 灰色北里孢菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCβ防御104試劑盒日蟾蜍他靈
硫氧化湖沉積桿菌Limnobacter│thiooxidans 質(zhì)量規(guī)格:≥10 units/ mg β-防御1試劑盒瑞枯靈
青色鏈霉菌Streptomyces│glaucus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCβ淀粉狀蛋白A4 肉豆蔻
精子稀釋液(含Trypan Blue,計(jì)數(shù)液)大腸桿 2-(三氟甲基)吩噻胞質(zhì)5核1A抗體
Pseudoxanthomonas 1-烯基環(huán)磺酰血管內(nèi)皮鈣黏蛋白抗體
絨奧德蘑 1-乙基-3-甲基咪唑雙鹽血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體
斑點(diǎn)青霉 N-Boc-氨基炔二型腺相關(guān)病
耐寒短桿 1-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基氧基)苯基)-3-甲基-1-丁酮腺相關(guān)病
圈卷產(chǎn)色鏈霉 3-十四烷基噻吩;滲透增強(qiáng)蛋白樣
炭疽健康皮張抗原 2,6-二甲基哌死骨片1-泛結(jié)合蛋白P62
凝結(jié)芽胞桿 2,6-二甲基哌轉(zhuǎn)錄激活因子MYB
巨大芽孢桿 2,4-二氟甲酯醌NADH脫氫1
雅致放射毛霉 6(5H)-5-氮雜菲酮CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α
解淀粉芽孢桿 4-氨基-6--2-甲硫基嘧啶甲基胞嘧啶雙加氧2
微小根毛霉 1-乙基-6,7,8-三氟-1,4-二氫-4-氧代-3-喹啉甲乙酯增強(qiáng)因子-1
根瘤 3--N-氧化物Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1
畢赤酵母 二單乙酯跨膜受體蛋白Notch-1
斯瓦特貝赫山克里布所 3,5-二硫脲白介36γ