產(chǎn)品介紹:
CHZ868是類型II的JAK2抑制劑,抑制EPOR JAK2WT Ba/F3cell細(xì)胞的IC50值為0.17μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1895895-38-1 純度:98.33% 分子量:423.42 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:JAK2抑制劑(CHZ868)
英文名稱:CHZ868
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10747
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
蘇云金芽胞桿菌蛋白磷4(抗原)Anti-GHRHR Antibody人轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)
枯草芽孢桿菌一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因(抗原)Anti-GGH Antibody人轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)
豚雙歧桿菌RRAD(多肽抗原)Anti-GHRL Antibody人天門冬轉(zhuǎn)/谷草轉(zhuǎn)(GOT/GPT)
窄脊正青霉基質(zhì)衍生因子-1(抗原)Anti-GGA3 Antibody人天門冬轉(zhuǎn)/谷草轉(zhuǎn)(GOT/GPT)
乳桿菌屬shank1多肽抗原Anti-GIMAP2 Antibody人肝脂(HL)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族22成員17(多肽抗原)Anti-GIMAP2 Antibody人肝脂(HL)
根瘤菌可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC24A5(抗原)Anti-GHSR Antibody人乙酰肝(HPA)
曲霉溶質(zhì)攜帶物家族-1(抗原)Anti-GIMAP4 Antibody人乙酰肝(HPA)
少根根霉依賴鈉鈣交換蛋白6(抗原)Anti-GIMAP5 Antibody人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)
意大利青霉凋亡抑制因子的一種(抗原)Anti-GIMAP5 Antibody人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)
串珠鐮孢核糖核蛋白抗原RO/SSA(抗原)Anti-GIT2 Antibody人纖維連接相關(guān)抗原(FRA)
德?tīng)柌加墟邎A酵母干燥癥SSB/La蛋白Anti-GIT1 Antibody人纖維連接相關(guān)抗原(FRA)
球孢白僵菌Smad 2(抗原)Anti-GIT1 Antibody人胃泌抗體(GCA)
呂氏泰勒蟲(chóng)(寧縣株)相關(guān)抗原5(多肽抗原)Anti-GJA3 Antibody人胃泌抗體(GCA)
枯草芽孢桿菌肺表面活性蛋白A(抗原)Anti-GJB7 Antibody人谷脫氫(GDH/GLDH)
蘋果鏈格孢滑膜凋亡抑制物1(抗體)Anti-GK Antibody人谷脫氫(GDH/GLDH)
沉默調(diào)節(jié)樣蛋白SirT7抗體許旺酵母變種人結(jié)直腸癌細(xì)胞(干細(xì)胞庫(kù)保藏)
SH2結(jié)構(gòu)域蛋白C3抗體馬克斯克魯維酵母人膀胱移行細(xì)胞癌
軸突導(dǎo)向因子SEMA6D抗體固囊酵母人甲狀腺癌細(xì)胞8305C(干細(xì)胞庫(kù)保藏)
組蛋白甲基轉(zhuǎn)移SMYD2抗體扣囊內(nèi)孢霉小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞
JAK2抑制劑(CHZ868)枯草芽胞桿枯草亞種 四硒蛋白P
鞘氨屬 5-甲基-1,10-菲咯啉Ⅱ型膠原蛋白
釀酒酵母 6-甲基-2,4-庚二酮環(huán)氧合1
氏假單胞 1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]-5-壬烯(DBN)O型口蹄疫抗原
流感嗜血桿 基氧基苯基硅烷亞洲1型口蹄疫病抗原
熒光假單胞 羧甲基纖維
畫(huà)眉草彎孢 木聚糖
蠟狀芽孢桿 5-溴香蘭微晶纖維
松口蘑 4-溴丁乙酯纖維二糖
樹(shù)舌3-1 (S)-(-)-2-代羧甲基纖維
松口蘑(可定) 2-氨基-2',5-二二苯酮木聚糖
Bacillus 2-巰基-5-甲基-1,3,4-噻二唑(MMTD)微晶纖維
產(chǎn)黃青霉 正辛基三乙氧基硅烷纖維二糖
曲霉 2-煙泰勒蟲(chóng)抗體
解葡聚糖類芽胞桿 代磷二乙酯干因子