細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X96998 |
商品屬性：
名稱 雞卵泡基膜細(xì)胞 2.組織來(lái)源：雞卵泡組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 雞卵泡基膜細(xì)胞分離自雞卵泡組織；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細(xì)胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細(xì)胞之間有一層基膜相隔，內(nèi)膜細(xì)胞呈多邊形，胞質(zhì)清亮，胞核圓形，細(xì)胞間可見(jiàn)許多毛細(xì)血管，外膜細(xì)胞位于最外層，多呈梭形，與周圍結(jié)締組織分界不明顯。卵泡（follicle）中卵母細(xì)胞四周有一層菱形或扁平細(xì)胞圍繞，在卵泡開(kāi)始發(fā)育、卵細(xì)胞成長(zhǎng)的同時(shí)，周圍的菱形細(xì)胞變?yōu)榱⒎叫?，并由單層增生成?fù)層，因其細(xì)胞漿內(nèi)含有顆粒，故稱為顆粒細(xì)胞。初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞為單層；次級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞增至復(fù)層；成熟卵泡的顆粒細(xì)胞展開(kāi)又變?yōu)閱螌印ｎw粒細(xì)胞的胞核大而圓，著色深，細(xì)胞的游離面有許多細(xì)長(zhǎng)突起伸入放射帶的凹陷部。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡基膜細(xì)胞采用先機(jī)械分離后膠原酶反復(fù)消化法、并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的雞卵泡基膜細(xì)胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-C002 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白
重組人 CCL27 / CTACK 蛋白 (His 標(biāo)簽)
重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽)
重組狗 CXCL13 / BCA-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白
重組食蟹猴 IL-8 / CXCL8 蛋白
重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白
重組小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白
重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白
重組食蟹
雞卵泡基膜細(xì)胞Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.5mlPHKG2 磷酸化激γ2 規(guī)格: 0.2ml
Ramulus mori桑枝染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周API2 凋亡抑制因子2抗體 規(guī)格: 0.2mlGRIM19 干擾素/維甲酸誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體 規(guī)格: 0.1ml
Porphyromonas gingivalis 牙齦卟啉單胞LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ZWILCH 著絲粒ZWILCH蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlLRPAP1/MRAP 脂蛋白受體相關(guān)蛋白抗體（脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1） 規(guī)格: 0.1ml
Clostridium chauvoei氣腫疽梭狀芽孢桿探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Bcl-2 Bcl-2抗體 規(guī)格: 0.1mlCCL23/MIP3 巨噬細(xì)胞性蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus toosendan川楝子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-IRAK1 (Thr387) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激1抗體 規(guī)格: 0.1mlC19orf47 19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框47抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rhodococcus equi馬紅球LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Aldolase C 醛C抗體 規(guī)格: 0.2mlHPV16-E7 人類狀瘤毒16-E7抗體 規(guī)格: 0.2ml
O'nyong-nyong Virus(ONNV)阿尼昂-尼昂病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ADCY9 苷酸環(huán)化9抗體 0.2mlCAMK1D 鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix sanguisorbae地榆LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周CTGF 結(jié)締組織生因子抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Listeria spp.李斯特通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PLAGL1/ZAC1 多型性瘤基因樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlC17orf42 17號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體 規(guī)格: 0.2ml
Sammarez Reef病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周UXT/Ubiquitously expressed transcript 廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體 規(guī)格: 0.2mlBEND5 BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
