細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 雞卵泡基膜細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X0678 |
商品介紹：
名稱 雞卵泡基膜細胞 2.組織來源：雞卵泡組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 雞卵泡基膜細胞分離自雞卵泡組織；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構(gòu)成分之一，卵泡腔很大，卵丘很明顯。卵泡內(nèi)膜細胞緊靠卵泡顆粒層，與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔，內(nèi)膜細胞呈多邊形，胞質(zhì)清亮，胞核圓形，細胞間可見許多毛細血管，外膜細胞位于最外層，多呈梭形，與周圍結(jié)締組織分界不明顯。卵泡（follicle）中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞，在卵泡開始發(fā)育、卵細胞成長的同時，周圍的菱形細胞變?yōu)榱⒎叫?，并由單層增生成復層，因其細胞漿內(nèi)含有顆粒，故稱為顆粒細胞。初級卵泡的顆粒細胞為單層；次級卵泡的顆粒細胞增至復層；成熟卵泡的顆粒細胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細胞的胞核大而圓，著色深，細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部。 5.方法簡介： ()實驗室分離的雞卵泡基膜細胞采用先機械分離后膠原酶反復消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的雞卵泡基膜細胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-C002 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
重組小鼠 XCL1 蛋白 (His 標簽)
重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白
重組人 CCL11 蛋白 (His 標簽)
重組小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標簽)
重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標簽)
重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標簽)
重組小鼠 CCL17 / TARC 蛋白
重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (His 標簽)
重組人 CCL21 / 6Cki
雞卵泡基膜細胞50T 布魯氏菌PCR試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
2 ug pTYB 11 pTYB 11 低溫運輸，-20℃保存
100mg 5-溴-2'-脫氧尿苷 5-Bromo-2’-Deoxyuridine -20℃保存
ASZ1 錨定蛋白樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Avidin/Bio 標記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CDC27/ANAPC3(Thr244) 磷酸化后期促進復合蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
CCP 瓜氨酸環(huán)肽抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-11 白介素11抗體 規(guī)格: 0.1ml
Follistatin 卵泡抑素抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-EGFR (Tyr998) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
L-Citrulline L-瓜氨酸抗體 規(guī)格: 0.2mgABHD13 水解結(jié)構(gòu)域蛋白13抗體 規(guī)格: 0.2ml
