procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說,也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm,發(fā)射波長(zhǎng)647 nm,7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
Calu-1(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CM-M037小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
KLRC1 Others Mouse 小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
TE-10細(xì)胞,人食管癌細(xì)胞 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,TG-905細(xì)胞 家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S1
小鼠肉瘤瘤株;S180
PTPRC Others Human 人 CD45 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
*HBSS
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
B95-8細(xì)胞,產(chǎn)EBV的絨猴白細(xì)胞 A549(人肺腺癌細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1
EFNA5 Protein Human 重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
HEL(人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
前脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基PADM-prf
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E 紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞,HEL299細(xì)胞 PT67細(xì)胞,鼠逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細(xì)胞
JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系 Human
LRP1 Others Human 人 LRP1 / A2MR / CD91 (aa 786-1165) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(SGK2)免疫試劑盒 human serum/glucocorticoid regulated kinase 2,SGK2 ISA KIT
人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒 ,英文名: APF ELISA Kit
RatInterferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanGastrointestinalcancerMarker-CA199ELISA試劑盒人胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin13,IL-13ELISAKit人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠*巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human retinol binding protein (RBP) ELISA Kit 人*結(jié)合蛋白(RBP)ELISA試劑盒
HumansecretoryimmunoglobulinA,SIgAELISAKit 人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAnti-smoothmuscleantibody,ASMAELISA試劑盒人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞周期S早期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
HumantrypsinELISAKit人*(trypsin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠apelin12(AP12)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝