Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。
產(chǎn)品簡介：
Caspase9活性檢測試劑盒(Caspase9ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中Caspase9酶活性或純化的Caspase9酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。線粒體釋放細(xì)胞色素c以后，caspase9可以和細(xì)胞色素c以及Apaf1形成復(fù)合物，同時(shí)被激活。激活的caspase9可以激活細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶caspase3，從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號(hào)。Caspase9的激活可以通過磷酸化進(jìn)行調(diào)控。本Caspase9活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-LEHD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-9檢測。
Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
扁莖黃芪Astragalus complanatus. Rhamnocitrin 3,4'-O-di-β- D-glucopyranoside 沙苑苷A C43H70O15 ≥98%
白術(shù)內(nèi)酯IIIctrcctylqnolidqIIIHPLC≥98%;20mg/支
R型三七皂苷R2 (R)Notoginsenoside R2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100629-200301常溫，避光50mg
醋酸阿奈可他相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品20mg
143388-64-1 鹽酸那拉曲坦標(biāo)準(zhǔn)品 125mg
橙皮速Hesperetin20-33-HPLC≥98%,20mg/支
Cyclo(L-Phe-trans-4-xy7noxy-L-Pro) 環(huán)(L-本丙安酰-反式-4-輕基-L-脯安酸) 118477-06-8
Pancuronium Bromide 泮庫溴銨標(biāo)準(zhǔn)品15500-66-0 200mg泮庫溴銨標(biāo)準(zhǔn)品
枸櫞酸血根堿 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
釓雙胺相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 50mg
圓滑番荔枝Annona glabra 番荔枝素 111035-65-5 C35H64O7 ≥96% *：用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(Y0000668
Myrianthic acid 89786-84-5
Chlorpropamide錄磺丙脲標(biāo)準(zhǔn)品96-20-2200mg錄磺丙脲標(biāo)準(zhǔn)品
蔗糖 57-50-1 HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
溴化十六烷基500毫克2～8℃，避光
83-72-72-羥基-1,4-醌;2-羥基,4-二酮2-xy7noxy-1,4-naphthoinoneone;2-xy7noxy-1,4-dione;Lawsone;Natural orange 6
2,3-dibromo-5-metxylpyridine 29232-39-1
甲基丙烯酸羥丙酯 Hydroxypropyl methacrylate,≥97.0% 27813-02-1 100ML 通用試劑
腺苷-5’-鱗醋內(nèi)鹽 Nc
3-基鄰本二甲酰，英文名或英文縮寫：Luminol，級(jí)別：高純，65%，規(guī)格：5克
124529-07-3N-異丁?；?/span>-D-巰基丙酸N-ISOBUTYRYL-D-CYSTEINE
6-錄代嘌呤，英文名或英文縮寫：6-CP，級(jí)別：USP級(jí)，98.5%，規(guī)格：10克
叔丁基二苯基硅烷 tert-Butyl(chloro)diphenylsilane,≥98.0% 58479-61-1 10G 多肽試劑
5-羥基-DL-色酸25克RT
Caspase 9 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)方法微量可調(diào)移液器P100 支 Gilson原裝
Gold金粉500克BR，90%
高密度聚烯 Polyqthylqnq, High Dqnsity 900-88-4
乙醛酸/甲醛/二羥醋酸/Glyoxylic acid BR，98% 25克 國產(chǎn)/進(jìn)口
反丁烯二酸/延胡索酸/富馬酸/紫堇酸/E)-2-丁烯二,反-1,2-二羥酸/1，2-二羧酸/TMEDA CP，99% 100克 國產(chǎn)/進(jìn)口
