Caspase 9 活性檢測試劑盒50T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Caspase 9 活性檢測試劑盒50T使用說明書儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

Caspase9活性檢測試劑盒(Caspase9ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase9酶活性或純化的Caspase9酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。線粒體釋放細胞色素c以后，caspase9可以和細胞色素c以及Apaf1形成復合物，同時被激活。激活的caspase9可以激活細胞凋亡的關(guān)鍵酶caspase3，從而促進后續(xù)的細胞凋亡信號。Caspase9的激活可以通過磷酸化進行調(diào)控。本Caspase9活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-LEHD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細胞或新鮮組織樣本的caspase-9檢測。

Caspase 9 活性檢測試劑盒50T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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遠志 Polygala tenuifolia Willd. Senegenin 遠志皂苷元 2469-34-3 C30H45CLO6 芥子酸(5764

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葛藤Pueraria lobata Melilotigenin B (4beta)-23-羥基齊墩果-12-烯-3,22-二酮 91269-84-0 C30H46O3 ≥95%
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(R)-(-)-2-基丁烷 (R)-()-sec-Butylamine,99% 13250-12-9 250MG 通用試劑
3-基本二甲酰10克

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鹽酸*shēng huà shì jì容量：25克
Caspase 9 活性檢測試劑盒50T使用說明書Devarda'salloy德瓦達合金100克GR，98%

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