Caspase 8 活性檢測試劑盒20T儲(chǔ)存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。
產(chǎn)品簡介：
Caspase8活性檢測試劑盒(Caspase8ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中Caspase8酶活性或純化的Caspase8酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個(gè)caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中caspase8被激活，形成一個(gè)由p18和p10組成的二聚體，進(jìn)一步激活下游的caspase4，caspase6，caspase9和caspase10.本Caspase8活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測。
Caspase 8 活性檢測試劑盒20T實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 8 活性檢測試劑盒20T注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
潺槁木姜子Litsea glutinosa Reticuline 牛心果鹼 485-19-8 C19H23NO4 ≥97%
膽紅速Bilirubin20mg/支
R、S表告依春 R、Sepigoitrin 1072-93-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
中藥對照藥材玉竹121467-200401TLC法鑒別
AlisolB-23-acetate澤瀉醇B-23-醋酸酯純度：≥97%
142-82-5 庚烷標(biāo)準(zhǔn)品 5ml
硫秋水仙苷Thiocolchicoside60-41-220mg
Taxifolin 3-O-xyloside 紫杉葉素 3-O-BETA-D-木糖苷 40672-47-7
*相關(guān)化合物 A標(biāo)準(zhǔn)品137862-87-4 10mg*相關(guān)化合物 A標(biāo)準(zhǔn)品
橄欖苦苷;Oleuropein 32619-42-4 20mg 訂購|咨詢
7084-24-4 矢車菊素-3-O-葡標(biāo)準(zhǔn)品 15mg
遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd. 3,6'-二芥子?；崽?/span> C36H46O17 ≥98% 東莨菪減19090-025
Hederagenin常春藤皂苷元20mg/支HPLC≥98%
甲磺酸奈非那韋標(biāo)準(zhǔn)品200mg甲磺酸奈非那韋標(biāo)準(zhǔn)品
厚樸酚 528-43-8 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
溴化四庚，英文名或英文縮寫：Tetraheptylammonium bromide，級別：4N，99.8%，規(guī)格：1克
6020-87-7肌酸Creatine monohydrate
偶氮二異丙基咪唑啉鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：AIBI，級別：AR，規(guī)格：500毫克
赤芝酸E Lucidenic acid E (HPLC,≥98%) 98665-17-9 5MG 通用試劑
Dowex 508 離子交換樹脂 DOWqX(R) 50 8 11119-67-8
3-基-9-乙基咔唑shēng huà shì jì容量：10克
丁二酰錄 SUCCINYL CHLORIDq 243-0-4
1,3-Benzothiazol-2-ylboronic acid 499769-96-9
芴甲氧羰酰胺 9-Fluorenylmethyl carbamate,≥99.0% 84418-43-9 5G 通用試劑
L-去甲/去甲/(R)-4-(2-基-1-羥基乙基)-1，2-苯二酚/L-Noradrenaline BR，98%， 500毫克 國產(chǎn)
Caspase 8 活性檢測試劑盒20T微量可調(diào)移液器P2 支 Gilson原裝
Gumtragacanthpowder西黃蓍膠粉5克GR，99.5%
多烯多安 Polyqthylqnq-polycminqs 68131-73-7
乙醛肟/亞乙基胲/Acetaldoxime BR，99%， 100毫升 國產(chǎn)/進(jìn)口
反式-2-己烯酸/反-2-己烯酸/(E)-2-己烯酸/2-己烯酸反式/Trans-2-Hexenoic acid BR，99%， 10克 進(jìn)分
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