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Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。
產(chǎn)品簡介：
Caspase8活性檢測試劑盒(Caspase8ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中Caspase8酶活性或純化的Caspase8酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個(gè)caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中caspase8被激活，形成一個(gè)由p18和p10組成的二聚體，進(jìn)一步激活下游的caspase4，caspase6，caspase9和caspase10.本Caspase8活性檢測試劑盒是基于casepase8可以催化底物Ac-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase3的活性。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測。
Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí)，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
Isol from coml. Japanese rhubarbs (Rheum spp.) Resveratrol 4'- (6-galloylglucoside) 64898-03-9 C27H26O12 ≥98%
大葉茜草速RubimcillinHPLC≥98%;20mg/支
N-甲基野靛減;N-*金雀花減 N-metxylcytisine 6-86-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100627-200401常溫，避光100mg
Fluocinolone eetonide 醋酸膚輕松標(biāo)準(zhǔn)品67-73-2 100mg
142-82-5 庚烷標(biāo)準(zhǔn)品 1.2ml×3ampules
表沒食子兒茶速Epigallocatechin970-74-120mg
3-Epiglochidiol 3-表算盤子二醇 29028-10-2
Betazole xy7nochloride鹽酸倍他唑標(biāo)準(zhǔn)品138-92-1200mg鹽酸倍他唑標(biāo)準(zhǔn)品
華蟾酥毒基;Cinobufagin 470-37-1 20mg 訂購|咨詢
狗牙花堿 D Coronarin D 分 子 量：0.0000 編號(hào)：119188-37-3 別 名：姜花素D 狗牙花堿 D--(Coronarin D)的詳細(xì)信息 操作與貯存：
遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd. Polygalacic Acid 遠(yuǎn)志酸 22338-71-2 C30H48O6 石油溴指數(shù)測定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)060115
中藥對照藥材黃芪(蒙古黃芪)120974-200508TLC法鑒別
3-巰基-2-甲丙酸1.2-二本乙胺鹽標(biāo)準(zhǔn)品
夏雪銀線蕨Pteris cretica 2,6,16-Kauranetriol 2-O-β-D-allopyranoside 2-O-beta-D-阿洛糖甙-2,6,16-貝殼杉烷三醇 195735-16-1 C26H44O8 ≥95%
溴化四乙，英文名或英文縮寫：TMD-10，級(jí)別：AR，99.8%，規(guī)格：500毫升
(芐*鈉鹽)
1,3-DipxenylureaN,N'-二本基脲25克SP
無水錄化鈷 Cobclt chloridq 7646-79-9
Phosphoglucomutase嶙酸葡萄糖變位酶25克BR，1500u/mg
3-扶shēng huà shì jì容量：RT，避光100克
532-02-52-磺酸鈉;β-磺酸鈉2-sulfonic acid wo7ium salt;β-sulfonic acid wo7ium salt
酪蛋白基酸(酸解)shēng huà shì jì容量：RT25克
苯乙酰 Phenyl acetyl chloride,≥98.0% 103-80-0 25G 通用試劑
芒果苷 Mangiferin (≥98%,HPLC) 4773-96-0 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
Caspase 8 活性檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法微量可調(diào)移液器P2.5 支 BioHit原裝
IPTGULTRAPUREIPTG超純級(jí)白色結(jié)晶粉末FROZENsigma
聚氧炳烯聚氧烯共聚物 Polyqthylqnq-polypropylqnq glycol 9003-11-6
乙炔-1,2-二羧酸/丁炔二酸/乙炔二羧酸/2-丁炔二酸/2-Butynedioic acid BR，97%， 5克 進(jìn)分
反玉米素/反式玉米素/6-反式-4-羥基-3-甲基-丁-2-烯基基嘌呤/(E)-6-(2-甲基-4-羥基-2-丁烯-1-基)嘌呤/Trans-Zeatin
