Caspase 3 活性檢測試劑盒20T使用說明書使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：Caspase 3 活性檢測試劑盒20T使用說明書
儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。
產(chǎn)品簡介：
Caspase3活性檢測試劑盒(Caspase3ActivityAssayKit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中Caspase3酶活性或純化的Caspase3酶活性的試劑盒。Caspase(Cysteine-requiringAspartateProtease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也稱CPP32、Yama或apopain，有時被寫作caspase-3或caspase3，屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3subfamily)，是細胞凋亡過程中的一個關(guān)鍵酶。Caspase3是哺乳動物細胞中研究多的一個caspase。Caspase-3在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基和兩個小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導(dǎo)致細胞凋亡。Caspase3可以剪切procaspase3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。這些由caspase3介導(dǎo)的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。
Caspase 3 活性檢測試劑盒20T使用說明書操作方法
1．懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2．對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡；
（1）將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Caspase 3 活性檢測試劑盒20T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細胞收集。懸浮細胞收集：離心5分鐘；貼壁細胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細胞；
（3）細胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞；
（5）Annexin V-FITC標記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
Cordia ecalyculata Resorcinol 間本二酚 108-46-3 C6H6O2 ≥95%
羥基紅花皇色速Axy7noxyscffloryqllowc20mg/支
(R型)人參皂苷Rh2 20(R)Ginsenoside Rh2 20mg HPLC≥98% 暫無簡介
HPLC法含量測定*100626- 200702 常溫，避光100mg
Flecainide Acetate 醋酸扶卡尼標準品54143-56-5 200mg
142-47-2 谷安酸一鈉標準品 1g
紫蓳靈;紫堇醇靈減PurpleJinLing;Corydalisalcoholspiritalkali18797-79-0HPLC≥98%,20mg/支
5,7-Dixy7noxychroMone 5,7-二輕基色原同 31721-94-5
炔本酰草胺 標準品 號：23950-58-5 250mg
4-甲基傘形酮(羥甲) 90-33-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
99300-78-4 鹽酸*標準品 100mg
遠志醋Polygalacicacid338-71-HPLC≥98%,20mg/支
Antirhine 16049-28-8
Dextrometxorphan*標準品125-71-32g
肌醇 87-89-8 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
溴化铔，英文名或英文縮寫：Ammonium bromide，級別：AR，99.8%，規(guī)格：500克
己酸乙脂NA
1,3-二[三(羥甲基)甲基]丙烷，英文名或英文縮寫：BIS-TRIS propane，級別：AR，規(guī)格：5克
赤芝酸B Lucidenic acid B (HPLC,≥98%) 95311-95-8 10MG 通用試劑
陶氏樹脂1x8，200-400目 DOWqX(R) 1X8 6067-37-0
3-本酸shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光25克
13770-61-1銦(陰涼)INDIUM nitnATE
苦酮酸shēng huà shì jì容量：2～8℃1克
2-甲氧基 2-Methoxy,99% 1993-4-9 25G 通用試劑
葡聚糖 T-2000 (右... Dextran T-2000 (分子量:2000,000) 9004-54-0 10G 分離試劑
Caspase 3 活性檢測試劑盒20T使用說明書Triaconta-三十烷醇1克USP級，660U/mg
血液*NA
酚紅葡萄糖肉湯shēng huà shì jì容量：100克
乙酸 Hydr acetate,97% 7335-65-1 5G 通用試劑
三白草酮 Sauchinone (≥98%,HPLC) 177931-17-8 20MG 標準品
