收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | PC-12大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963214 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
#N/A Betulinic Acid methyl ester 5mg Brucella.melitensis羊布氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)
2280/1/5 Ac-D-Trp-OH 5g Angiostrongylus cantonensis管圓線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)
2280/1/5 Ac-D-Trp-OH 25g Angiostrongylus cantonensis管圓線蟲PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)
2309/7/1 Ferulic Acid methyl ester 500mg Angiostrongylus cantonensis管圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)
2309/7/1 Ferulic Acid methyl ester 1g Angiostrongylus cantonensis管圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)
N6-Benzoyladenine 4005-49-6 中文名:N6-苯甲?;汆堰?/span> 分子式:C12H9N5O 度:98.0% 小鼠細胞膜表面球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine 64325-78-6 中文名:N6-苯甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷 分子式:C38H35N5O6 度:98.0% 小鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
N4-Benzoylcytosine 26661-13-2 中文名:N4-苯甲?;奏?/span> 分子式:C11H9N3O2 度:98.0% 小鼠細胞色素P450(mouse Cytochrome P450) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
N4-Benzoylcytidine 13089-48-0 中文名:N4-苯甲酰胞苷 分子式:C16H17N3O6 度:98.0% 小鼠C反應蛋白(mouse CRP) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
N4-Benzoyl-2'-deoxycytidine 4836-13-9 中文名:N4-苯甲?;?/span>-2'-脫氧胞苷 分子式:C16H17N3O5 度:98.0% 小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝
PC-12大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)10030-78-1 2-(Methylamino)-1H-purin-6(7H)-one (N2-methylguanine) 100mg Semen raphani萊菔子探針法PCR鑒定試劑盒
10030-78-1 2-(Methylamino)-1H-purin-6(7H)-one (N2-methylguanine) 10mg Omphalia雷丸探針法PCR鑒定試劑盒
10030-78-1 2-(Methylamino)-1H-purin-6(7H)-one (N2-methylguanine) 10mM*1mLinDMSO Semen litchi荔枝核探針法PCR鑒定試劑盒
10030-78-1 2-(Methylamino)-1H-purin-6(7H)-one (N2-methylguanine) 50mg Omphalia雷丸探針法PCR鑒定試劑盒
10030-78-1 2-(Methylamino)-1H-purin-6(7H)-one (N2-methylguanine) 5mg Semen litchi荔枝核探針法PCR鑒定試劑盒