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JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒使用說明書儲存條件：JC-1 -20℃避光保存，避免反復凍融。孵育緩沖液2-8℃保存。
有效期：一年。
產(chǎn)品簡介：
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)的理想熒光探針?？梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，488nm激發(fā)時的大發(fā)射波長為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式圖上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體，488nm激發(fā)時大發(fā)射波長為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖中所有細胞FL1均為陽性。凋亡細胞則大多為FL1單陽性。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)可以快速靈敏地檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位變化，可以用于早期的細胞凋亡檢測。試劑盒染料與其他的陽離子染料如DiOC6(3)和羅丹明123相比，特異性更高，對線粒體膜電位變化的特異性高于質膜電位變化，對線粒體去極化檢測的檢測*性更好；紅綠色熒光強度比率只受線粒體膜電位的變化，不受線粒體大小，形狀，密度的差異干擾；檢測靈敏度強，對細胞應激反應的微小異質性都能辨別；
實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Actin, Muscle Specific 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Actin,Pan 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Actin,Skeletal Muscle 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Actin,Smooth Muscle 濃縮液 0.1ml 進口分裝
AFP 0.5ml甲胎蛋白 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Alpha-1-Antichymotrypsin抗胰* 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Amyloid Beta 淀粉樣蛋白 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Androgen Receptor 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Apaf-1 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Apolipoprotein D 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Bak 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Bax 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Bcl-2 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Bcl-6 濃縮液 0.1ml 進口分裝
brdu 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Catenin,beta 濃縮液 0.1ml 進口分裝
Cadherin,Pan 濃縮液 0.1ml 進口分裝
激活素受體1B抗體 豬脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA Kit Pig lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Kit
雄激素受體相關蛋白24抗體 豬脂蛋白脂酶(LPL)ELISA Kit Pig lipoprotein lipase,LPL ELISA kit
淀粉樣肽前體蛋白抗體 豬脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA Kit Pig lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2 ELISA Kit
腺苷酸環(huán)化酶2抗體 豬正常T細胞表達和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA Kit Pig regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA Kit
載脂蛋白C3抗體 豬粘膜血管地址素細胞黏附分子1(MADCAM1)ELISA Kit Pig mucosal vascular addressin cell adhesion molecule 1,MADCAM1 ELISA kit
載脂蛋白E4抗體 豬粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA Kit Pig mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA Kit
自噬相關基因AMBRA1抗體 豬粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA Kit Pig mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit
磷酸化自噬相關蛋白4C抗體 豬粘蛋白/粘液素2(MUC2)ELISA Kit Pig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit
磷酸化自噬相關蛋白4C抗體 豬粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA Kit Pig Mucin-1,MUC1 ELISA Kit
磷酸化細胞凋亡信號調節(jié)激酶1抗體 豬早老素2(PS-2)ELISA Kit Pig Presenilin 2,PS-2 ELISA Kit
磷酸化失調癥蛋白1抗體 豬早老素1(PS-1)ELISA Kit Pig Presenilin 1,PS-1 ELISA Kit
脊髓小腦失調癥蛋白1抗體 豬載脂蛋白E(Apo-E)ELISA Kit Pig apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體 豬載脂蛋白A5(apo-A5)ELISA Kit Pig Apolipoprotein A5,apo-A5 ELISA Kit
磷酸化細胞凋亡信號調節(jié)激酶1抗體 豬甾體合成急性調節(jié)蛋白(StAR)ELISA Kit Pig steroidacute regulatory protein,StAR ELISA kit
磷酸化細胞凋亡信號調節(jié)激酶1抗體 豬誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA Kit Pig inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA Kit
磷酸化活化復制因子2抗體 豬游離脂肪酸(FFA)ELISA Kit Pig free fatty acids,FFA ELISA Kit
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 豬游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA Kit Pig free tri-iodothyronine indes,FT3 ELISA kit
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 豬游離甲狀腺素(FT4)ELISA Kit Pig free thyroxine,FT4 ELISA kit
乙酰*羧化酶抗體 豬胰高血糖素樣肽2(GLP2)ELISA Kit Pig glucagon like peptide 2,GLP2 ELISA kit
磷酸化乙酰*羧化酶抗體 豬胰高血糖素樣肽1(GLP1)ELISA Kit Pig glucagon like peptide 1,GLP1 ELISA Kit
磷酸化Ack1抗體 豬胰高血糖素(GC)ELISA Kit Pig Glucagon,GC ELISA Kit
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 豬胰*α2(PAMY α2)ELISA Kit Pig Pancreatic Amylase α2,PAMY α2 ELISA Kit
