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產品名稱 | 小鼠全骨髓細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1308 |
商品介紹:
名稱 小鼠全骨髓細胞 2.組織來源:骨髓 3.產品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 小鼠全骨髓細胞分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網眼中,是一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。全骨髓細胞即骨髓內除紅細胞外的全部細胞。 5.方法簡介: ()實驗室分離的小鼠全骨髓細胞細胞采用沖洗骨髓、紅細胞裂解法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的小鼠全骨髓細胞經過檢測,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M211 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖;不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
5mL 骨骼肌細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
250mL Alkaline Running Buffer(堿變性膠電泳液) Alkaline Running Buffer 常溫保存
1.5mL DNA堿性膠上樣液,6× DNAoN for Alkaline Gel -20℃保存
2 ug pGC- 3 pGC- 3 低溫運輸,-20℃保存
抗生素檢定培養(yǎng)基4號 Antibiotic Agar NO.4 250g
2 ug pAAV-hrRC p?嵌?L?
小鼠全骨髓細胞10%纖維二糖水溶液 英文名稱: 產品規(guī)格:5ml×10支 小鼠D2(VD2)免疫試劑盒進口、組裝
霍亂紅胨水 英文名稱: 產品規(guī)格:20支 小鼠D(VD)免疫試劑盒進口、分裝
BTB培養(yǎng)基 英文名稱:BTB,Medium 產品規(guī)格:250g 小鼠C(VC)免疫試劑盒現貨供應
PAC斜面培養(yǎng)基 英文名稱:Plate Count Agar 產品規(guī)格:250g 小鼠B6(VB6)免疫試劑盒*直銷
四號瓊脂 英文名稱:No.4 Agar Base 產品規(guī)格:250g 小鼠B12(VB12)免疫試劑盒進口、組裝
CC瓊脂添加劑 英文名稱:CC Agar Supplement 產品規(guī)格:1ml*5支 小鼠A(VA)免疫試劑盒進口、分裝
纖維二糖-E(CC)瓊脂 英文名稱:Cellobiose-polymyxin E Agar 產品規(guī)格:250g 小鼠微管相關蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)免疫試劑盒現貨供應
精雙水解試驗用培養(yǎng)基(AD) 英文名稱:Aaginine dehydrolase Medium 產品規(guī)格:5g 小鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒*直銷
嗜鹽性試驗用胰胨水 英文名稱:Halophilic experimental medium 產品規(guī)格:250g 小鼠網膜素(omentin)免疫試劑盒進口、組裝
副溶血性弧菌成套生化鑒定管(HRGB) 英文名稱: 產品規(guī)格:10種*2套/盒*5盒 小鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)免疫試劑盒進口、分裝