小鼠呼吸道上皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：7084-24-4矢-3-O- 規(guī)格： 20mg
77-92-9檸檬;Citric acid 規(guī)格： 100mg
19309-14-9小豆蔻明 規(guī)格： 20mg
4－[2－（5--2－甲酰胺） 規(guī)格： 50mg
486-86-2N-甲基野靛 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial
26159-34-2萘
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠呼吸道上皮細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X1214 |
商品介紹：
名稱 小鼠呼吸道上皮細(xì)胞 2.組織來(lái)源：呼吸道 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠呼吸道上皮細(xì)胞分離自呼吸道；呼吸道是肺呼吸時(shí)氣流所經(jīng)過(guò)的通道，有肺脊椎動(dòng)物的呼吸道分上、下兩部：鼻、咽和喉合稱上呼吸道。氣管及其以后一分再分的管道，合稱為下呼吸道，或稱為氣管樹(shù)。氣管樹(shù)是隨著動(dòng)物的進(jìn)化逐漸復(fù)雜化的。整個(gè)呼吸道內(nèi)表面都分布有分泌液和纖毛（鼻孔、咽后壁和聲帶黏膜除外），它能溫暖（或冷卻）、濕潤(rùn)和凈化吸入的空氣，對(duì)于呼吸器官和機(jī)體有著保護(hù)作用。呼吸道以骨或軟骨做支架，其內(nèi)表面覆蓋著黏膜，黏膜內(nèi)分布著豐富的毛細(xì)血管。呼吸道上皮細(xì)胞屬于假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮，分布于呼吸道的內(nèi)表面，主要由柱狀，杯形，梭形和錐形等不同形狀細(xì)胞組成。看上去像復(fù)層上皮，但實(shí)際上所有細(xì)胞底部均附于基膜上，屬單層上皮，故稱假?gòu)?fù)層柱狀上皮，上皮表面有纖毛，杯狀細(xì)胞可分泌粘液，包裹著大量細(xì)菌，借助纖毛不斷擺動(dòng)將其慢慢移動(dòng)至出消化道。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠呼吸道上皮細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠呼吸道上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M175 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
素B(4ug) 1ml/支*5
1瓶 NB-4細(xì)胞株 NB-4 低溫運(yùn)輸和保存
雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 Double Lactose Bile Medium 250g
100g β- β-Amylase 4℃保存
1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X,low salt) Tris Buffered Saline(TBS),10X,low salt) 常溫保存
25mg 化的牛血清白蛋白 Biotin-BSA -20℃保存
2 ug pThio-His A pTh?嵌?L?
小鼠呼吸道上皮細(xì)胞500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH4.4 Phosphate Buffer，0.2M, pH4.4 常溫保存
1g 甲基綠 Methyl Green 室溫干燥保存
2 ug pSecTag 2A pSecTag 2A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50T 病毒H5亞型PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
2 ug pPIC 3.5K pPIC 3.5K 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
BDNF 腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cortactin 皮層肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
25U β －瓊脂糖 β－Agarase -20℃保存
PPAR alpha α型-過(guò)氧化活化增生受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
IGFBP2 胰島素樣生因子結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
ADM (ProAM-N20) 上髓質(zhì)素抗體(N端20肽) 規(guī)格: 0.1ml
Caspase-12 半胱胺酸蛋白蛋白-12抗體 規(guī)格: 0.1ml
